中华传染病杂志
中華傳染病雜誌
중화전염병잡지
CHINESE JOURNAL OF INFECTIOUS DISEASES
2004年
1期
38-41
,共4页
董关萍%吕娟芬%尚世强%余钟声%俞锡林%宋莉莉%邵祝洪
董關萍%呂娟芬%尚世彊%餘鐘聲%俞錫林%宋莉莉%邵祝洪
동관평%려연분%상세강%여종성%유석림%송리리%소축홍
依赖于DNA的DNA聚合酶%多态性,限制性片段长度%克隆,分子
依賴于DNA的DNA聚閤酶%多態性,限製性片段長度%剋隆,分子
의뢰우DNA적DNA취합매%다태성,한제성편단장도%극륭,분자
目的快速检测6种疱疹类病毒DNA.方法在疱疹类病毒高度同源序列DNA多聚酶基因中设计两对通用引物,一对扩增单纯疱疹病毒Ⅰ型与Ⅱ型、爱泼斯坦-巴尔病毒和人巨细胞病毒4种病毒,另一对扩增水痘-带状疱疹病毒和人类疱疹病毒6型2种病毒.经DNA聚合酶链反应(PCR)扩增,并对扩增产物进行分子克隆序列分析后,选择BamHⅠ或BstUⅠ酶切对扩增产物进行鉴别.结果6种标准病毒株PCR扩增后产物为510～592 bp,其最小检出量为0.1fg,与乙型肝炎病毒、真菌、细菌和人类基因组DNA无交叉反应.用该方法检测临床89份脑脊液(CSF)和75份血标本中的疱疹类病毒,13份(14.6%)CSF和26份(34.7%)血标本为阳性,通过BamHⅠ或BstUⅠ两种酶切后能明确系何种疱疹类病毒.同时用酶联免疫吸附(ELISA)法检测该标本的HSVⅠ/Ⅱ、EBV和CMV这4种病毒的IgM,10例阳性.这4种病毒的PCR阳性检出率为30.7%,而ELISA法为13 3%(P＜0.05),具有显著的差异性.38例正常健康儿童的血和9份非病毒感染的CSF标本6种疱疹类病毒DNA均为阴性.结论PCR加限制性内切酶片段长度多态性分析具有特异敏感,快速准确的特点,为疱疹类病毒感染的早期快速诊断提供了有效的手段.
目的快速檢測6種皰疹類病毒DNA.方法在皰疹類病毒高度同源序列DNA多聚酶基因中設計兩對通用引物,一對擴增單純皰疹病毒Ⅰ型與Ⅱ型、愛潑斯坦-巴爾病毒和人巨細胞病毒4種病毒,另一對擴增水痘-帶狀皰疹病毒和人類皰疹病毒6型2種病毒.經DNA聚閤酶鏈反應(PCR)擴增,併對擴增產物進行分子剋隆序列分析後,選擇BamHⅠ或BstUⅠ酶切對擴增產物進行鑒彆.結果6種標準病毒株PCR擴增後產物為510～592 bp,其最小檢齣量為0.1fg,與乙型肝炎病毒、真菌、細菌和人類基因組DNA無交扠反應.用該方法檢測臨床89份腦脊液(CSF)和75份血標本中的皰疹類病毒,13份(14.6%)CSF和26份(34.7%)血標本為暘性,通過BamHⅠ或BstUⅠ兩種酶切後能明確繫何種皰疹類病毒.同時用酶聯免疫吸附(ELISA)法檢測該標本的HSVⅠ/Ⅱ、EBV和CMV這4種病毒的IgM,10例暘性.這4種病毒的PCR暘性檢齣率為30.7%,而ELISA法為13 3%(P＜0.05),具有顯著的差異性.38例正常健康兒童的血和9份非病毒感染的CSF標本6種皰疹類病毒DNA均為陰性.結論PCR加限製性內切酶片段長度多態性分析具有特異敏感,快速準確的特點,為皰疹類病毒感染的早期快速診斷提供瞭有效的手段.
목적쾌속검측6충포진류병독DNA.방법재포진류병독고도동원서렬DNA다취매기인중설계량대통용인물,일대확증단순포진병독Ⅰ형여Ⅱ형、애발사탄-파이병독화인거세포병독4충병독,령일대확증수두-대상포진병독화인류포진병독6형2충병독.경DNA취합매련반응(PCR)확증,병대확증산물진행분자극륭서렬분석후,선택BamHⅠ혹BstUⅠ매절대확증산물진행감별.결과6충표준병독주PCR확증후산물위510～592 bp,기최소검출량위0.1fg,여을형간염병독、진균、세균화인류기인조DNA무교차반응.용해방법검측림상89빈뇌척액(CSF)화75빈혈표본중적포진류병독,13빈(14.6%)CSF화26빈(34.7%)혈표본위양성,통과BamHⅠ혹BstUⅠ량충매절후능명학계하충포진류병독.동시용매련면역흡부(ELISA)법검측해표본적HSVⅠ/Ⅱ、EBV화CMV저4충병독적IgM,10례양성.저4충병독적PCR양성검출솔위30.7%,이ELISA법위13 3%(P＜0.05),구유현저적차이성.38례정상건강인동적혈화9빈비병독감염적CSF표본6충포진류병독DNA균위음성.결론PCR가한제성내절매편단장도다태성분석구유특이민감,쾌속준학적특점,위포진류병독감염적조기쾌속진단제공료유효적수단.
