生物工程学报
生物工程學報
생물공정학보
CHINESE JOURNAL OF BIOTECHNOLOGY
2002年
6期
729-734
,共6页
唐雪明%王正祥%邵蔚蓝%刘吉泉%方慧英%诸葛健
唐雪明%王正祥%邵蔚藍%劉吉泉%方慧英%諸葛健
당설명%왕정상%소위람%류길천%방혜영%제갈건
碱性蛋白酶,基因工程菌BP071,发酵条件,重组酶的纯化及 性质
堿性蛋白酶,基因工程菌BP071,髮酵條件,重組酶的純化及 性質
감성단백매,기인공정균BP071,발효조건,중조매적순화급 성질
在5L发酵罐中对重组碱性蛋白酶工程菌株BP071高产碱性蛋白酶的条件进行了研究, 通过提高通气量和改变搅拌转速,BP071可在发酵40 h内达到产酶高峰,酶活力最高可达244 80 u/mL.利用快速蛋白液相层析(FPLC)技术,建立了快速高效纯化碱性蛋白酶的方案. 发酵液通过硫酸铵沉淀、DEAE-A-50脱色及聚乙二醇浓缩得粗酶,再经过CM-Sephadex-C -50、Sephadex-G-75柱层析后得到了单一组份的重组碱性蛋白酶,酶纯度提高了76.2倍 .SDS-P AGE显示重组碱性蛋白酶分子量为28 kD.酶学性质研究表明,酶的最适作用pH为11,最适作用温度为60℃,具有良好的pH稳定性和热稳定性.Ca2+、Mg2+对酶的稳定性有促进作用,Hg2+、Ag+、PMFS和DFP能强烈抑制酶的活力.SDS和Urea对酶的活力无影响.
在5L髮酵罐中對重組堿性蛋白酶工程菌株BP071高產堿性蛋白酶的條件進行瞭研究, 通過提高通氣量和改變攪拌轉速,BP071可在髮酵40 h內達到產酶高峰,酶活力最高可達244 80 u/mL.利用快速蛋白液相層析(FPLC)技術,建立瞭快速高效純化堿性蛋白酶的方案. 髮酵液通過硫痠銨沉澱、DEAE-A-50脫色及聚乙二醇濃縮得粗酶,再經過CM-Sephadex-C -50、Sephadex-G-75柱層析後得到瞭單一組份的重組堿性蛋白酶,酶純度提高瞭76.2倍 .SDS-P AGE顯示重組堿性蛋白酶分子量為28 kD.酶學性質研究錶明,酶的最適作用pH為11,最適作用溫度為60℃,具有良好的pH穩定性和熱穩定性.Ca2+、Mg2+對酶的穩定性有促進作用,Hg2+、Ag+、PMFS和DFP能彊烈抑製酶的活力.SDS和Urea對酶的活力無影響.
재5L발효관중대중조감성단백매공정균주BP071고산감성단백매적조건진행료연구, 통과제고통기량화개변교반전속,BP071가재발효40 h내체도산매고봉,매활력최고가체244 80 u/mL.이용쾌속단백액상층석(FPLC)기술,건립료쾌속고효순화감성단백매적방안. 발효액통과류산안침정、DEAE-A-50탈색급취을이순농축득조매,재경과CM-Sephadex-C -50、Sephadex-G-75주층석후득도료단일조빈적중조감성단백매,매순도제고료76.2배 .SDS-P AGE현시중조감성단백매분자량위28 kD.매학성질연구표명,매적최괄작용pH위11,최괄작용온도위60℃,구유량호적pH은정성화열은정성.Ca2+、Mg2+대매적은정성유촉진작용,Hg2+、Ag+、PMFS화DFP능강렬억제매적활력.SDS화Urea대매적활력무영향.
