吉林大学学报（医学版）
吉林大學學報（醫學版）
길림대학학보（의학판）
JOURNAL OF JILIN UNIVERSITY(MEDICINE EDITION)
2006年
2期
189-193
,共5页
李峰%邵月婷%何静春%秦宣锋%陈超%王驭良%孙连坤%李扬%赵雪俭
李峰%邵月婷%何靜春%秦宣鋒%陳超%王馭良%孫連坤%李颺%趙雪儉
리봉%소월정%하정춘%진선봉%진초%왕어량%손련곤%리양%조설검
受体,雌激素%激素非依赖性前列腺癌细胞%前列腺肿瘤%真核表达%遗传载体%转染
受體,雌激素%激素非依賴性前列腺癌細胞%前列腺腫瘤%真覈錶達%遺傳載體%轉染
수체,자격소%격소비의뢰성전렬선암세포%전렬선종류%진핵표체%유전재체%전염
目的:构建人雌激素受体β(hERβ)全长基因的真核表达载体pEGFP-C1-hERβ,并转染激素非依赖性前列腺癌细胞株PC-3M.方法:采用RT-PCR法从卵巢囊肿患者切除的部分正常卵巢组织中钓取hERβ全长基因(1 593 bp),与pMD18-T载体连接做全自动序列测定.将测序正确的克隆质粒pMD18-T-hERβ和表达载体pEGFP-C1分别用HindⅢ和BamH Ⅰ进行双酶切,应用基因重组技术构建hERβ全长基因真核表达载体pEGFP-C1-hERβ.质粒经HindⅢ和BamHⅠ双酶切和PCR电泳鉴定后,采用脂质体转染法转染PC-3M细胞.结果:重组质粒经限制性酶切鉴定得到与hERβ全长基因长度一致(1 612 bp)的酶切产物;测序分析证实,PCR产物与GenBank上登录的hERβ基因(NM_001437)序列完全一致,表明成功地完成了hERβ的扩增和表达载体的构建;荧光显微镜下可见转染的PC-3M细胞有绿色荧光蛋白的表达;PCR测定分析,转染细胞hERβ的表达增加.结论:构建完成真核表达载体pEGFP-C1-hERβ,hERβ基因在PC-3M细胞内成功表达.
目的:構建人雌激素受體β(hERβ)全長基因的真覈錶達載體pEGFP-C1-hERβ,併轉染激素非依賴性前列腺癌細胞株PC-3M.方法:採用RT-PCR法從卵巢囊腫患者切除的部分正常卵巢組織中釣取hERβ全長基因(1 593 bp),與pMD18-T載體連接做全自動序列測定.將測序正確的剋隆質粒pMD18-T-hERβ和錶達載體pEGFP-C1分彆用HindⅢ和BamH Ⅰ進行雙酶切,應用基因重組技術構建hERβ全長基因真覈錶達載體pEGFP-C1-hERβ.質粒經HindⅢ和BamHⅠ雙酶切和PCR電泳鑒定後,採用脂質體轉染法轉染PC-3M細胞.結果:重組質粒經限製性酶切鑒定得到與hERβ全長基因長度一緻(1 612 bp)的酶切產物;測序分析證實,PCR產物與GenBank上登錄的hERβ基因(NM_001437)序列完全一緻,錶明成功地完成瞭hERβ的擴增和錶達載體的構建;熒光顯微鏡下可見轉染的PC-3M細胞有綠色熒光蛋白的錶達;PCR測定分析,轉染細胞hERβ的錶達增加.結論:構建完成真覈錶達載體pEGFP-C1-hERβ,hERβ基因在PC-3M細胞內成功錶達.
목적:구건인자격소수체β(hERβ)전장기인적진핵표체재체pEGFP-C1-hERβ,병전염격소비의뢰성전렬선암세포주PC-3M.방법:채용RT-PCR법종란소낭종환자절제적부분정상란소조직중조취hERβ전장기인(1 593 bp),여pMD18-T재체련접주전자동서렬측정.장측서정학적극륭질립pMD18-T-hERβ화표체재체pEGFP-C1분별용HindⅢ화BamH Ⅰ진행쌍매절,응용기인중조기술구건hERβ전장기인진핵표체재체pEGFP-C1-hERβ.질립경HindⅢ화BamHⅠ쌍매절화PCR전영감정후,채용지질체전염법전염PC-3M세포.결과:중조질립경한제성매절감정득도여hERβ전장기인장도일치(1 612 bp)적매절산물;측서분석증실,PCR산물여GenBank상등록적hERβ기인(NM_001437)서렬완전일치,표명성공지완성료hERβ적확증화표체재체적구건;형광현미경하가견전염적PC-3M세포유록색형광단백적표체;PCR측정분석,전염세포hERβ적표체증가.결론:구건완성진핵표체재체pEGFP-C1-hERβ,hERβ기인재PC-3M세포내성공표체.
