第三军医大学学报
第三軍醫大學學報
제삼군의대학학보
ACTA ACADEMIAE MEDICINAE MILITARIS TERTIAE
2007年
21期
2070-2072
,共3页
曾凡新%董志%傅洁民%刘晓海
曾凡新%董誌%傅潔民%劉曉海
증범신%동지%부길민%류효해
β3肾上腺素受体%真核表达载体%HEK293细胞
β3腎上腺素受體%真覈錶達載體%HEK293細胞
β3신상선소수체%진핵표체재체%HEK293세포
目的 构建人β3肾上腺素受体 (β3-AR)的真核表达质粒pcDNA3.1(+)-β3-AR,并通过脂质体介导转染HEK293细胞使之表达该受体蛋白.方法 以pENTR_ADRB3-Stop质粒为模板,采用PCR法扩增出人β3-AR cDNA,将其插入真核表达载体pcDNA3.1(+)中,构建成真核表达质粒pcDNA3.1(+)-β3-AR.将该质粒转染HEK293真核细胞,通过RT-PCR检测β3-AR mRNA在HEK293细胞内的表达,通过免疫荧光法检测β3-AR蛋白在HEK293细胞中的表达.结果 酶切和DNA测序鉴定均证实重组质粒含有人β3-AR编码区全长.在转染重组质粒pcDNA3.1(+)-β3-AR的HEK293细胞中检测到了β3-AR基因的转录和翻译产物.结论 通过基因工程方法成功构建了β3-AR的真核表达质粒pcDNA3.1(+)-β3-AR,为进一步建立β3-AR的稳定表达细胞株,用于筛选高效、高选择性β3-AR激动剂奠定了基础.
目的 構建人β3腎上腺素受體 (β3-AR)的真覈錶達質粒pcDNA3.1(+)-β3-AR,併通過脂質體介導轉染HEK293細胞使之錶達該受體蛋白.方法 以pENTR_ADRB3-Stop質粒為模闆,採用PCR法擴增齣人β3-AR cDNA,將其插入真覈錶達載體pcDNA3.1(+)中,構建成真覈錶達質粒pcDNA3.1(+)-β3-AR.將該質粒轉染HEK293真覈細胞,通過RT-PCR檢測β3-AR mRNA在HEK293細胞內的錶達,通過免疫熒光法檢測β3-AR蛋白在HEK293細胞中的錶達.結果 酶切和DNA測序鑒定均證實重組質粒含有人β3-AR編碼區全長.在轉染重組質粒pcDNA3.1(+)-β3-AR的HEK293細胞中檢測到瞭β3-AR基因的轉錄和翻譯產物.結論 通過基因工程方法成功構建瞭β3-AR的真覈錶達質粒pcDNA3.1(+)-β3-AR,為進一步建立β3-AR的穩定錶達細胞株,用于篩選高效、高選擇性β3-AR激動劑奠定瞭基礎.
목적 구건인β3신상선소수체 (β3-AR)적진핵표체질립pcDNA3.1(+)-β3-AR,병통과지질체개도전염HEK293세포사지표체해수체단백.방법 이pENTR_ADRB3-Stop질립위모판,채용PCR법확증출인β3-AR cDNA,장기삽입진핵표체재체pcDNA3.1(+)중,구건성진핵표체질립pcDNA3.1(+)-β3-AR.장해질립전염HEK293진핵세포,통과RT-PCR검측β3-AR mRNA재HEK293세포내적표체,통과면역형광법검측β3-AR단백재HEK293세포중적표체.결과 매절화DNA측서감정균증실중조질립함유인β3-AR편마구전장.재전염중조질립pcDNA3.1(+)-β3-AR적HEK293세포중검측도료β3-AR기인적전록화번역산물.결론 통과기인공정방법성공구건료β3-AR적진핵표체질립pcDNA3.1(+)-β3-AR,위진일보건립β3-AR적은정표체세포주,용우사선고효、고선택성β3-AR격동제전정료기출.
