中国预防兽医学报
中國預防獸醫學報
중국예방수의학보
CHINESE JOURNAL OF PREVENTIVE VETERINARY MEDICINE
2008年
11期
831-835
,共5页
樊树芳%许传田%索永兵%陈化兰
樊樹芳%許傳田%索永兵%陳化蘭
번수방%허전전%색영병%진화란
禽流感病毒%反向遗传操作%救获病毒%冷适应性%温度敏感性
禽流感病毒%反嚮遺傳操作%救穫病毒%冷適應性%溫度敏感性
금류감병독%반향유전조작%구획병독%랭괄응성%온도민감성
A/Ann Arbor/6/60ca(H2N2)冷适应疫苗供体株具有冷适应性、温度敏感性和致弱性表型.本研究利用基因工程技术体外合成A/Ann Arbor/6/60ca(H2N2)冷适应疫苗株具有冷适应性的内部基因PB2、PB1、PA、NP、M、NS,从A/Anhui/2/2005(H5N1)毒株获得HA、NA,并对HA基因上的多个连续碱性氨基酸基序进行了缺失修饰.将上述8个基因片段分别克隆至pBD双向表达载体中测序鉴定.利用质粒反向遗传操作系统,将构建正确的8个重组pBD质粒转染Vero细胞拯救病毒.经RT-PCR和序列测定鉴定,结果表明本试验成功获得了一株H5N1亚型A/Anhui/2/2005重组病毒,将其命名为AH/Aaca,救获的重组病毒具有预期的温度敏感性和冷适应性生物学特性.随后进行了AH/Aaca人工感染SPF鸡的感染性和致病性试验,结果表明其对鸡既无感染性,也无致病性.AH/Aaca的获得为评价其在小鼠、非人类灵长目等动物模型上的保护效力的研究打下了坚实基础,为我国预防人禽流感的流行建立了技术储备.
A/Ann Arbor/6/60ca(H2N2)冷適應疫苗供體株具有冷適應性、溫度敏感性和緻弱性錶型.本研究利用基因工程技術體外閤成A/Ann Arbor/6/60ca(H2N2)冷適應疫苗株具有冷適應性的內部基因PB2、PB1、PA、NP、M、NS,從A/Anhui/2/2005(H5N1)毒株穫得HA、NA,併對HA基因上的多箇連續堿性氨基痠基序進行瞭缺失脩飾.將上述8箇基因片段分彆剋隆至pBD雙嚮錶達載體中測序鑒定.利用質粒反嚮遺傳操作繫統,將構建正確的8箇重組pBD質粒轉染Vero細胞拯救病毒.經RT-PCR和序列測定鑒定,結果錶明本試驗成功穫得瞭一株H5N1亞型A/Anhui/2/2005重組病毒,將其命名為AH/Aaca,救穫的重組病毒具有預期的溫度敏感性和冷適應性生物學特性.隨後進行瞭AH/Aaca人工感染SPF鷄的感染性和緻病性試驗,結果錶明其對鷄既無感染性,也無緻病性.AH/Aaca的穫得為評價其在小鼠、非人類靈長目等動物模型上的保護效力的研究打下瞭堅實基礎,為我國預防人禽流感的流行建立瞭技術儲備.
A/Ann Arbor/6/60ca(H2N2)랭괄응역묘공체주구유랭괄응성、온도민감성화치약성표형.본연구이용기인공정기술체외합성A/Ann Arbor/6/60ca(H2N2)랭괄응역묘주구유랭괄응성적내부기인PB2、PB1、PA、NP、M、NS,종A/Anhui/2/2005(H5N1)독주획득HA、NA,병대HA기인상적다개련속감성안기산기서진행료결실수식.장상술8개기인편단분별극륭지pBD쌍향표체재체중측서감정.이용질립반향유전조작계통,장구건정학적8개중조pBD질립전염Vero세포증구병독.경RT-PCR화서렬측정감정,결과표명본시험성공획득료일주H5N1아형A/Anhui/2/2005중조병독,장기명명위AH/Aaca,구획적중조병독구유예기적온도민감성화랭괄응성생물학특성.수후진행료AH/Aaca인공감염SPF계적감염성화치병성시험,결과표명기대계기무감염성,야무치병성.AH/Aaca적획득위평개기재소서、비인류령장목등동물모형상적보호효력적연구타하료견실기출,위아국예방인금류감적류행건립료기술저비.
