CAJ | 학술논문

多单位核酶对慢性粒细胞白血病细胞的增殖抑制及凋亡诱导效应研究
다단위핵매대만성립세포백혈병세포적증식억제급조망유도효응연구
The effect of multi-unit ribozymes on the growth inhibition and apoptosis induction of CML K562 cells

万方数据

中华肿瘤杂志中華腫瘤雜誌 중화종류잡지
CHINESE JOURNAL OF ONCOLOGY
2002年 5期 435-439 ,共5页

冯琦%孙秉中%孙凯%尚振川%王莎%王玮%赵永同%颜真%韩苇%张英起

풍기%손병중%손개%상진천%왕사%왕위%조영동%안진%한위%장영기

白血病,慢性粒细胞%bcr-abl基因%核酶%细胞凋亡白血病,慢性粒細胞%bcr-abl基因%覈酶%細胞凋亡
백혈병,만성립세포%bcr-abl기인%핵매%세포조망

目的探讨多单位核酶体外净化慢性粒细胞白血病(慢粒)骨髓的可能性,研究多单位核酶的体外切割活性及对慢粒细胞恶性表型的逆转作用.方法针对慢粒发病中起重要作用的bcr-abl融合基因,在融合位点两侧44碱基范围内设计、合成3个核酶,其中2个切割位点位于bcr基因,1个位于abl基因.通过基因重组构建多单位核酶体外转录载体及逆转录病毒表达载体,鉴定其体外切割活性.将多单位核酶逆转录病毒表达载体转染K562细胞,应用MTT、3H-TdR掺入、RT-PCR、斑点杂交、流式细胞仪、透射及扫描电镜等方法,检测多单位核酶对慢粒细胞增殖活性及细胞超微结构、细胞周期、凋亡等的影响.结果多单位核酶的体外切割活性为70.8%,逆转录病毒载体转染慢粒K562细胞系后,细胞DNA合成及细胞增殖受到明显抑制,转染后96 h抑制率达50%左右.多单位核酶转染细胞后能够有效切割细胞RNA,使转染细胞RNA减少1 000倍左右.流式细胞仪检测显示多单位核酶转染72 h后,18.4%的细胞发生凋亡,大多数细胞被阻滞于G期,分裂期(S期)细胞数减少约41.9%.透射、扫描电镜见转染细胞出现核固缩、凋亡小体等细胞凋亡的特异性表现. 结论多单位核酶不仅具有较高的体外切割活性,而且其逆转录病毒载体能够有效转染慢粒细胞系,在细胞内持续表达、切割细胞RNA,诱导细胞凋亡,抑制细胞增殖,逆转慢粒细胞的恶性表型,在慢粒基因治疗中具有潜在应用价值.
목적탐토다단위핵매체외정화만성립세포백혈병(만립)골수적가능성,연구다단위핵매적체외절할활성급대만립세포악성표형적역전작용.방법침대만립발병중기중요작용적bcr-abl융합기인,재융합위점량측44감기범위내설계、합성3개핵매,기중2개절할위점위우bcr기인,1개위우abl기인.통과기인중조구건다단위핵매체외전록재체급역전록병독표체재체,감정기체외절할활성.장다단위핵매역전록병독표체재체전염K562세포,응용MTT、3H-TdR참입、RT-PCR、반점잡교、류식세포의、투사급소묘전경등방법,검측다단위핵매대만립세포증식활성급세포초미결구、세포주기、조망등적영향.결과다단위핵매적체외절할활성위70.8%,역전록병독재체전염만립K562세포계후,세포DNA합성급세포증식수도명현억제,전염후96 h억제솔체50%좌우.다단위핵매전염세포후능구유효절할세포RNA,사전염세포RNA감소1 000배좌우.류식세포의검측현시다단위핵매전염72 h후,18.4%적세포발생조망,대다수세포피조체우G기,분렬기(S기)세포수감소약41.9%.투사、소묘전경견전염세포출현핵고축、조망소체등세포조망적특이성표현. 결론다단위핵매불부구유교고적체외절할활성,이차기역전록병독재체능구유효전염만립세포계,재세포내지속표체、절할세포RNA,유도세포조망,억제세포증식,역전만립세포적악성표형,재만립기인치료중구유잠재응용개치.