CAJ | 학술논문

目的制备常压高体积分数氧(高氧)性脑损伤7日龄新生大鼠动物模犁,探讨TNF-α在高氧性脑细胞凋亡发生中的作用.方法取112只体质量12～18 g的7日龄SD大鼠,随机分为2组:高氧组(依高氧暴露时间分为高氧暴露2、6、12、24 h组,每组14只)和空气对照组(各时间点新生大鼠数目与高氧组相同).高氧组新生大鼠与母鼠一起置于氧箱中,调节氧流量(3 L/min)使箱内氧体积分数维持在(800±50)mL/L,用数字式测氧仪进行监测.空气对照组置于同一室内空气中,氧体积分数为210 mL/L.高氧/空气开始暴露24 h后各处死10只大鼠,取其脑组织常规脱水、包埋、切片,脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的原位缺口末端标记(TUNEL)法观察其脑组织细胞凋亡指数,免疫组织化学染色法检测其脑组织半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、TNF-α的表达水平.高氧暴露后2、6、12、24 h各处死4只大鼠,取左脑组织提取RNA,反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测TNF-αmRNA,以β-actin为内参,计算相对单位,并与空气对照组比较.结果高氧2 h组脑细胞凋亡指数较空气对照组增加(F=88.39 P<0.01),随着吸氧时间的延长,细胞凋亡渐增多,以高氧12、24 h组细胞凋亡最明显(F=119.57,153.48 Pn<0.01).随着吸氧时间的延长,新生大鼠脑组织TNF-α、Caspaso-3的表达水平明显升高,而TNF-α mRNA的表达在吸氧后2 h开始上升(P<0.05),12 h达高峰(P<0.01),24 h开始下降.TNF-α表达水平与脑细胞凋亡程度、Caspase-3表达水平均呈正相关(r=0.986,0.982 Pn<0.01).结论常压高氧可引起新生大鼠脑细胞凋亡和TNF-α mRNA及其蛋白的过度表达.TNF-α与高氧性脑细胞凋亡的发生密切相关,TNF-α可能通过Caspase-3途径诱导脑细胞凋亡.
목적 제비상압고체적분수양(고양)성뇌손상7일령신생대서동물모리,탐토TNF-α재고양성뇌세포조망발생중적작용.방법 취112지체질량12～18 g적7일령SD대서,수궤분위2조:고양조(의고양폭로시간분위고양폭로2、6、12、24 h조,매조14지)화공기대조조(각시간점신생대서수목여고양조상동).고양조신생대서여모서일기치우양상중,조절양류량(3 L/min)사상내양체적분수유지재(800±50)mL/L,용수자식측양의진행감측.공기대조조치우동일실내공기중,양체적분수위210 mL/L.고양/공기개시폭로24 h후각처사10지대서,취기뇌조직상규탈수、포매、절편,탈양핵당핵감산말단전이매개도적원위결구말단표기(TUNEL)법관찰기뇌조직세포조망지수,면역조직화학염색법검측기뇌조직반광안산단백매-3(Caspase-3)、TNF-α적표체수평.고양폭로후2、6、12、24 h각처사4지대서,취좌뇌조직제취RNA,반전록취합매련반응(RT-PCR)검측TNF-αmRNA,이β-actin위내삼,계산상대단위,병여공기대조조비교.결과 고양2 h조뇌세포조망지수교공기대조조증가(F=88.39 P<0.01),수착흡양시간적연장,세포조망점증다,이고양12、24 h조세포조망최명현(F=119.57,153.48 Pn<0.01).수착흡양시간적연장,신생대서뇌조직TNF-α、Caspaso-3적표체수평명현승고,이TNF-α mRNA적표체재흡양후2 h개시상승(P<0.05),12 h체고봉(P<0.01),24 h개시하강.TNF-α표체수평여뇌세포조망정도、Caspase-3표체수평균정정상관(r=0.986,0.982 Pn<0.01).결론 상압고양가인기신생대서뇌세포조망화TNF-α mRNA급기단백적과도표체.TNF-α여고양성뇌세포조망적발생밀절상관,TNF-α가능통과Caspase-3도경유도뇌세포조망.