CAJ | 학술논문

目的:探索将兔骨髓间充质干细胞(Mesenchymal Stem Cells,MSCs)在体外定向诱导分化为类许旺细胞(Schwann Cells,SC)有效的诱导方法.方法:(1)中国白兔5只,穿刺抽取股骨大转子骨髓3 mL,用密度为1.073 g/mL的percoll淋巴分离液行密度梯度分离,吸取中间白色膜状细胞层,接种在加有10%FCS的DMEM培养液的塑料培养瓶中,观察细胞形态并传代.(2)MSCs传至第3代,实验组加入加有0.5 mmol β-巯基乙醇、20 ng/mL全反式黄酸、2.5 μmol Forskolin、5 ng/mL bFGF、20 ng/mL PDGF、100 ng/mL HRG的培养液培养24 h,然后换用10%FBS的DMEM培养液培养24 h,同样方法再诱导一次.对照组不加诱导剂,用10%FCS的DMEM培养液培养.观察两组MSCs的细胞形态,7 d后用抗S-100、GFAP和P75抗体做免疫组织化学染色来鉴定诱导后MSCs.结果:MSCs在体外培养以梭形细胞为主,细胞平行排列或旋涡状生长,胞浆丰富,核大,核染色质细,有些核仁明显.细胞经多次传代后,呈长梭型.加入诱导剂后有少量细胞死亡,诱导后的细胞免疫组化阳性.诱导后细胞S-100、GFAP、P75免疫组化染色阳性率分别为74.9%、83%、70%.结论:兔MSCs可以在体外培养、增殖,并经β-巯基乙醇、全反式黄酸、Forskolin、bFGF、PDGF、HRG联合诱导分化为类SC.
목적:탐색장토골수간충질간세포(Mesenchymal Stem Cells,MSCs)재체외정향유도분화위류허왕세포(Schwann Cells,SC)유효적유도방법.방법:(1)중국백토5지,천자추취고골대전자골수3 mL,용밀도위1.073 g/mL적percoll림파분리액행밀도제도분리,흡취중간백색막상세포층,접충재가유10%FCS적DMEM배양액적소료배양병중,관찰세포형태병전대.(2)MSCs전지제3대,실험조가입가유0.5 mmol β-구기을순、20 ng/mL전반식황산、2.5 μmol Forskolin、5 ng/mL bFGF、20 ng/mL PDGF、100 ng/mL HRG적배양액배양24 h,연후환용10%FBS적DMEM배양액배양24 h,동양방법재유도일차.대조조불가유도제,용10%FCS적DMEM배양액배양.관찰량조MSCs적세포형태,7 d후용항S-100、GFAP화P75항체주면역조직화학염색래감정유도후MSCs.결과:MSCs재체외배양이사형세포위주,세포평행배렬혹선와상생장,포장봉부,핵대,핵염색질세,유사핵인명현.세포경다차전대후,정장사형.가입유도제후유소량세포사망,유도후적세포면역조화양성.유도후세포S-100、GFAP、P75면역조화염색양성솔분별위74.9%、83%、70%.결론:토MSCs가이재체외배양、증식,병경β-구기을순、전반식황산、Forskolin、bFGF、PDGF、HRG연합유도분화위류SC.