中华医学杂志
中華醫學雜誌
중화의학잡지
National Medical Journal of China
2003年
5期
417-420
,共4页
肖家全%谭建明%李成涛%康敏华%方燕红%李瑶%沈瑾%丁言德
肖傢全%譚建明%李成濤%康敏華%方燕紅%李瑤%瀋瑾%丁言德
초가전%담건명%리성도%강민화%방연홍%리요%침근%정언덕
人白细胞抗原%基因分型%移植%基因芯片
人白細胞抗原%基因分型%移植%基因芯片
인백세포항원%기인분형%이식%기인심편
目的建立一种用于HLA-DRB分型的基因芯片,并通过与PCR-SSP比较,评价芯片的性能.方法根据中国汉族南方人常见的HLA-DRB位点基因及其多态性的独特序列,在第二外显子区域设计特异性的寡核苷酸分型探针,将其点在玻片上,制成芯片.基因组DNA通过组间特异引物扩增,扩增中同时用荧光素Cy5标记.扩增标记后的产物与结合在芯片上的探针进行杂交,通过荧光扫描仪对杂交产生的荧光信号值进行分析,确定样品的HLA-DRB基因亚型.将这一方法应用于110份样本的HLA-DRB基因分型并与PCR-SSP分型的结果进行比较.结果110份淋巴细胞样本,除1份PCR无产物致芯片不能分型外,其余样本芯片分型全部成功.不吻合样本10份:其中SSP定型纯合子6份,芯片分型全部为杂合子,SSP定型为杂合子1份,芯片结果为纯合.经第三方用PCR-SSO验证,证实芯片分型正确.另外3份不吻合的样本经测序,证实SSP分型错误2份,芯片分型错误1份.芯片的重复率为95%.结论基因芯片是一种理想的分型方法,具有特异性高、重复性好、操作简便、所需样本量少、结果判读容易、一次可作多份样本的优点.
目的建立一種用于HLA-DRB分型的基因芯片,併通過與PCR-SSP比較,評價芯片的性能.方法根據中國漢族南方人常見的HLA-DRB位點基因及其多態性的獨特序列,在第二外顯子區域設計特異性的寡覈苷痠分型探針,將其點在玻片上,製成芯片.基因組DNA通過組間特異引物擴增,擴增中同時用熒光素Cy5標記.擴增標記後的產物與結閤在芯片上的探針進行雜交,通過熒光掃描儀對雜交產生的熒光信號值進行分析,確定樣品的HLA-DRB基因亞型.將這一方法應用于110份樣本的HLA-DRB基因分型併與PCR-SSP分型的結果進行比較.結果110份淋巴細胞樣本,除1份PCR無產物緻芯片不能分型外,其餘樣本芯片分型全部成功.不吻閤樣本10份:其中SSP定型純閤子6份,芯片分型全部為雜閤子,SSP定型為雜閤子1份,芯片結果為純閤.經第三方用PCR-SSO驗證,證實芯片分型正確.另外3份不吻閤的樣本經測序,證實SSP分型錯誤2份,芯片分型錯誤1份.芯片的重複率為95%.結論基因芯片是一種理想的分型方法,具有特異性高、重複性好、操作簡便、所需樣本量少、結果判讀容易、一次可作多份樣本的優點.
목적건립일충용우HLA-DRB분형적기인심편,병통과여PCR-SSP비교,평개심편적성능.방법근거중국한족남방인상견적HLA-DRB위점기인급기다태성적독특서렬,재제이외현자구역설계특이성적과핵감산분형탐침,장기점재파편상,제성심편.기인조DNA통과조간특이인물확증,확증중동시용형광소Cy5표기.확증표기후적산물여결합재심편상적탐침진행잡교,통과형광소묘의대잡교산생적형광신호치진행분석,학정양품적HLA-DRB기인아형.장저일방법응용우110빈양본적HLA-DRB기인분형병여PCR-SSP분형적결과진행비교.결과110빈림파세포양본,제1빈PCR무산물치심편불능분형외,기여양본심편분형전부성공.불문합양본10빈:기중SSP정형순합자6빈,심편분형전부위잡합자,SSP정형위잡합자1빈,심편결과위순합.경제삼방용PCR-SSO험증,증실심편분형정학.령외3빈불문합적양본경측서,증실SSP분형착오2빈,심편분형착오1빈.심편적중복솔위95%.결론기인심편시일충이상적분형방법,구유특이성고、중복성호、조작간편、소수양본량소、결과판독용역、일차가작다빈양본적우점.
