中华实验外科杂志
中華實驗外科雜誌
중화실험외과잡지
CHINESE JOURNAL OF EXPERIMENTAL SURGERY
2006年
12期
1502-1504
,共3页
曹俊%孙铁汉%丁铭佑%陈颖%刘超红%于皆平%于红刚
曹俊%孫鐵漢%丁銘祐%陳穎%劉超紅%于皆平%于紅剛
조준%손철한%정명우%진영%류초홍%우개평%우홍강
FRNK基因%腺病毒载体%基因治疗
FRNK基因%腺病毒載體%基因治療
FRNK기인%선병독재체%기인치료
目的 应用AdEasy复制缺陷型腺病毒载体系统构建小鼠FRNK基因重组腺病毒,并在293HEK细胞中扩增制备重组病毒.方法 把小鼠FRNK基因克隆入腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV中,构建腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV-FRNK,经Pme I内切酶酶切成线性化后,采用电穿孔转化将其转化到含有腺病毒骨架载体pAdEasy-1的感受态大肠杆菌BJ5183中,通过卡那霉素筛选获得阳性腺病毒重组质粒.再将获得的腺病毒重组质粒转染到293HEK细胞进行包装,获得FRNK重组腺病毒pAdFRNK.荧光显微镜下观察绿荧光的表达.结果 经酶切和绿荧光表达证明了小鼠FRNK基因的重组腺病毒载体pAdFRNK构建成功,并制备出高滴度的重组病毒.结论 成功构建携带小鼠FRNK基因的重组腺病毒pAdFRNK,为研究FRNK的基因治疗奠定了基础.
目的 應用AdEasy複製缺陷型腺病毒載體繫統構建小鼠FRNK基因重組腺病毒,併在293HEK細胞中擴增製備重組病毒.方法 把小鼠FRNK基因剋隆入腺病毒穿梭載體pAdTrack-CMV中,構建腺病毒穿梭質粒pAdTrack-CMV-FRNK,經Pme I內切酶酶切成線性化後,採用電穿孔轉化將其轉化到含有腺病毒骨架載體pAdEasy-1的感受態大腸桿菌BJ5183中,通過卡那黴素篩選穫得暘性腺病毒重組質粒.再將穫得的腺病毒重組質粒轉染到293HEK細胞進行包裝,穫得FRNK重組腺病毒pAdFRNK.熒光顯微鏡下觀察綠熒光的錶達.結果 經酶切和綠熒光錶達證明瞭小鼠FRNK基因的重組腺病毒載體pAdFRNK構建成功,併製備齣高滴度的重組病毒.結論 成功構建攜帶小鼠FRNK基因的重組腺病毒pAdFRNK,為研究FRNK的基因治療奠定瞭基礎.
목적 응용AdEasy복제결함형선병독재체계통구건소서FRNK기인중조선병독,병재293HEK세포중확증제비중조병독.방법 파소서FRNK기인극륭입선병독천사재체pAdTrack-CMV중,구건선병독천사질립pAdTrack-CMV-FRNK,경Pme I내절매매절성선성화후,채용전천공전화장기전화도함유선병독골가재체pAdEasy-1적감수태대장간균BJ5183중,통과잡나매소사선획득양성선병독중조질립.재장획득적선병독중조질립전염도293HEK세포진행포장,획득FRNK중조선병독pAdFRNK.형광현미경하관찰록형광적표체.결과 경매절화록형광표체증명료소서FRNK기인적중조선병독재체pAdFRNK구건성공,병제비출고적도적중조병독.결론 성공구건휴대소서FRNK기인적중조선병독pAdFRNK,위연구FRNK적기인치료전정료기출.
