中国实验血液学杂志
中國實驗血液學雜誌
중국실험혈액학잡지
JOURNAL OF EXPERIMENTAL HEMATOLOGY
2012年
3期
769-772
,共4页
TEC启动子%BCR/AB基因%BaF3细胞%转基因小鼠模型
TEC啟動子%BCR/AB基因%BaF3細胞%轉基因小鼠模型
TEC계동자%BCR/AB기인%BaF3세포%전기인소서모형
转P210bcr/abl因小鼠是研究慢性髓系白血病的理想模型,但广泛表达的启动子容易引起转基因小鼠的胚胎致死,所以应用在造血细胞中特异表达的启动子是成功建立转P210bcr/abl基因小鼠模型的关键.本研究探讨TEC启动子介导BCR/ABL基因在BF3细胞中的表达.从小鼠的基因组中克隆TEC启动子的- 364至+22区域,并替换掉IRES2 -eGFP载体的CMVie启动子,同时在该载体的EcorⅠ酶切位点插入7.2 kb的P210bcr/abl基因,再将构建好的载体分别转染BaF3细胞和293细胞,观察eGFP基因与P210bcr/abl基因在2种细胞中的表达情况.结果通过荧光显微镜和流式细胞仪检测发现,eGFP基因在BaF3细胞成功表达,表达率在转染后6、24、72 h分别为7.10％、23.35％和64.61％,而在293细胞中未见eGFP基因表达.RT-PCR在BaF3细胞中扩增出BCR/ABL mRNA中372 bp的片段,而在293细胞中未扩增出任何片段.结论:TEC启动子的-364至+22区域能介导相关基因在造血细胞中高效特异性表达,适合于构建转P210bcr/abl基因小鼠模型.
轉P210bcr/abl因小鼠是研究慢性髓繫白血病的理想模型,但廣汎錶達的啟動子容易引起轉基因小鼠的胚胎緻死,所以應用在造血細胞中特異錶達的啟動子是成功建立轉P210bcr/abl基因小鼠模型的關鍵.本研究探討TEC啟動子介導BCR/ABL基因在BF3細胞中的錶達.從小鼠的基因組中剋隆TEC啟動子的- 364至+22區域,併替換掉IRES2 -eGFP載體的CMVie啟動子,同時在該載體的EcorⅠ酶切位點插入7.2 kb的P210bcr/abl基因,再將構建好的載體分彆轉染BaF3細胞和293細胞,觀察eGFP基因與P210bcr/abl基因在2種細胞中的錶達情況.結果通過熒光顯微鏡和流式細胞儀檢測髮現,eGFP基因在BaF3細胞成功錶達,錶達率在轉染後6、24、72 h分彆為7.10％、23.35％和64.61％,而在293細胞中未見eGFP基因錶達.RT-PCR在BaF3細胞中擴增齣BCR/ABL mRNA中372 bp的片段,而在293細胞中未擴增齣任何片段.結論:TEC啟動子的-364至+22區域能介導相關基因在造血細胞中高效特異性錶達,適閤于構建轉P210bcr/abl基因小鼠模型.
전P210bcr/abl인소서시연구만성수계백혈병적이상모형,단엄범표체적계동자용역인기전기인소서적배태치사,소이응용재조혈세포중특이표체적계동자시성공건립전P210bcr/abl기인소서모형적관건.본연구탐토TEC계동자개도BCR/ABL기인재BF3세포중적표체.종소서적기인조중극륭TEC계동자적- 364지+22구역,병체환도IRES2 -eGFP재체적CMVie계동자,동시재해재체적EcorⅠ매절위점삽입7.2 kb적P210bcr/abl기인,재장구건호적재체분별전염BaF3세포화293세포,관찰eGFP기인여P210bcr/abl기인재2충세포중적표체정황.결과통과형광현미경화류식세포의검측발현,eGFP기인재BaF3세포성공표체,표체솔재전염후6、24、72 h분별위7.10％、23.35％화64.61％,이재293세포중미견eGFP기인표체.RT-PCR재BaF3세포중확증출BCR/ABL mRNA중372 bp적편단,이재293세포중미확증출임하편단.결론:TEC계동자적-364지+22구역능개도상관기인재조혈세포중고효특이성표체,괄합우구건전P210bcr/abl기인소서모형.
