CAJ | 학술논문

新型重组免疫抑制蛋白B7-2-L-PE40KDEL的分子构建与生物活性及结构特性
신형중조면역억제단백B7-2-L-PE40KDEL적분자구건여생물활성급결구특성
Construction, bioactivity identification and structural characteristics analysis of a novel recombinant immunosuppression protein B7-2-L-PE40KDEL

万方数据

中华医学杂志中華醫學雜誌 중화의학잡지
National Medical Journal of China
2002年 22期 1541-1545 ,共5页

袁志宏%奚永志%张惠丽%孔繁华%关海容%郭斯启%刘楠%梁飞%孙玉英%崔建武

원지굉%해영지%장혜려%공번화%관해용%곽사계%류남%량비%손옥영%최건무

淋巴细胞转化%外毒素类%移植物抗宿主病%免疫耐受淋巴細胞轉化%外毒素類%移植物抗宿主病%免疫耐受
림파세포전화%외독소류%이식물항숙주병%면역내수

目的构建重组B7-2-L-PE40KDEL融合蛋白,特异性杀伤CD28高表达的T细胞,选择性阻断T淋巴细胞活化过程中的B7:CD28/CTLA-4共刺激信号系统,由此诱导免疫耐受,特异性防治移植物抗宿主疾病(GVHD)和宿主抗移植物疾病(HVGD).方法采用基因融合序列重叠延伸(SOE)策略,构建新型重组pRSETA-B7-2-L-PE40KDEL外毒素融合蛋白的原核表达载体,实现融合蛋白在大肠杆菌中的高效表达,利用亲和层析等方法进行蛋白质纯化.对该融合蛋白的结构特征诸如等电点、柔性等进行模拟分析.采用MTT法对其特异性杀伤高表达CD28受体的T细胞的活性进行测定.结果构建并高效表达了B7-2-L-PE40KDEL融合蛋白,所获融合蛋白的纯度大于95% .该融合蛋白的结构特征模拟分析的结果显示,其柔性及抗原性、亲水性表位均未显著改变.活性测定显示,该重组融合蛋白能有效特异性地杀伤高表达CD28的人T淋巴瘤细胞系,而对未表达CD28的人白血病细胞系则无任何杀伤.结论具有靶向性免疫抑制活性的新型重组B7-2-L-PE40KDEL外毒素融合蛋白的构建、表达对特异性防治GVHD和HVGD可能产生积极的影响.
목적구건중조B7-2-L-PE40KDEL융합단백,특이성살상CD28고표체적T세포,선택성조단T림파세포활화과정중적B7:CD28/CTLA-4공자격신호계통,유차유도면역내수,특이성방치이식물항숙주질병(GVHD)화숙주항이식물질병(HVGD).방법채용기인융합서렬중첩연신(SOE)책략,구건신형중조pRSETA-B7-2-L-PE40KDEL외독소융합단백적원핵표체재체,실현융합단백재대장간균중적고효표체,이용친화층석등방법진행단백질순화.대해융합단백적결구특정제여등전점、유성등진행모의분석.채용MTT법대기특이성살상고표체CD28수체적T세포적활성진행측정.결과구건병고효표체료B7-2-L-PE40KDEL융합단백,소획융합단백적순도대우95% .해융합단백적결구특정모의분석적결과현시,기유성급항원성、친수성표위균미현저개변.활성측정현시,해중조융합단백능유효특이성지살상고표체CD28적인T림파류세포계,이대미표체CD28적인백혈병세포계칙무임하살상.결론구유파향성면역억제활성적신형중조B7-2-L-PE40KDEL외독소융합단백적구건、표체대특이성방치GVHD화HVGD가능산생적겁적영향.