南京农业大学学报
南京農業大學學報
남경농업대학학보
JOURNAL OF NANJING AGRICULTURAL UNIVERSITY
2011年
1期
107-112
,共6页
方剑玉%郑其升%郭小参%侯凤香%王琳%陶红梅%侯继波%陈溥言
方劍玉%鄭其升%郭小參%侯鳳香%王琳%陶紅梅%侯繼波%陳溥言
방검옥%정기승%곽소삼%후봉향%왕림%도홍매%후계파%진부언
高致病猪繁殖与呼吸综合征病毒%M蛋白%T细胞表位%表位优势区
高緻病豬繁殖與呼吸綜閤徵病毒%M蛋白%T細胞錶位%錶位優勢區
고치병저번식여호흡종합정병독%M단백%T세포표위%표위우세구
采用RT-PCR方法扩增猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)临床分离株的M基因(525 bp),通过设计4对引物,把M蛋白分成4段K1(78-112)、K2(98-131)、K3(118-153)、K4(139-174),分别扩增相应基因M1、K1、K2、K3和K4,连接pET-32a(+)表达载体,经鉴定后转化Escherichia coli BL21,经IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western-blot检测结果显示,分别在相对分子质量30.8×103和24.4×103位置出现目的条带,重组蛋白均可与阳性血清发生特异反应.将蛋白M1免疫BALB/c小鼠,于第三次免2周后从小鼠脾脏分离淋巴细胞,分别用K1、K2、K3、K4蛋白进行体外刺激.流式细胞仪检测分泌IFN-γ细胞因子的T细胞的频率,K1蛋白刺激组显著高于其他组和对照组(P≤0.01).结论:M1蛋白K1(78-112)段为T细胞表位优势区.
採用RT-PCR方法擴增豬繁殖與呼吸障礙綜閤徵病毒(PRRSV)臨床分離株的M基因(525 bp),通過設計4對引物,把M蛋白分成4段K1(78-112)、K2(98-131)、K3(118-153)、K4(139-174),分彆擴增相應基因M1、K1、K2、K3和K4,連接pET-32a(+)錶達載體,經鑒定後轉化Escherichia coli BL21,經IPTG誘導錶達,SDS-PAGE和Western-blot檢測結果顯示,分彆在相對分子質量30.8×103和24.4×103位置齣現目的條帶,重組蛋白均可與暘性血清髮生特異反應.將蛋白M1免疫BALB/c小鼠,于第三次免2週後從小鼠脾髒分離淋巴細胞,分彆用K1、K2、K3、K4蛋白進行體外刺激.流式細胞儀檢測分泌IFN-γ細胞因子的T細胞的頻率,K1蛋白刺激組顯著高于其他組和對照組(P≤0.01).結論:M1蛋白K1(78-112)段為T細胞錶位優勢區.
채용RT-PCR방법확증저번식여호흡장애종합정병독(PRRSV)림상분리주적M기인(525 bp),통과설계4대인물,파M단백분성4단K1(78-112)、K2(98-131)、K3(118-153)、K4(139-174),분별확증상응기인M1、K1、K2、K3화K4,련접pET-32a(+)표체재체,경감정후전화Escherichia coli BL21,경IPTG유도표체,SDS-PAGE화Western-blot검측결과현시,분별재상대분자질량30.8×103화24.4×103위치출현목적조대,중조단백균가여양성혈청발생특이반응.장단백M1면역BALB/c소서,우제삼차면2주후종소서비장분리림파세포,분별용K1、K2、K3、K4단백진행체외자격.류식세포의검측분비IFN-γ세포인자적T세포적빈솔,K1단백자격조현저고우기타조화대조조(P≤0.01).결론:M1단백K1(78-112)단위T세포표위우세구.
