CAJ | 학술논문

为筛选和优化出较适宜的苎麻脱胶菌群DNA提取方法,本文分别以来自苎麻沤麻环境的6种纯培养菌等丰度混合物和苎麻自然沤麻菌群为材料,研究"溶菌酶-SDS"法、"超声波-溶菌酶-SDS"法、"蛋白酶K-SDS"法以及"冻融-蛋白酶K-SDS"法4种DNA提取方法对菌群16S rDNA基因PCR-DGGE偏移结果的影响.结果表明,4种方法均能从2类材料中提取出了超过1 600 ng/μL的DNA,不同方法之间DNA产率略有差异,经过超声波处理或反复冻融处理的DNA有明显的降解,但4种方法提供的DNA模板均扩增出了450 bp的16S rDNA基因片段.4种DNA提取方法对DGGE结果有明显影响,且只有"冻融-蛋白酶K-SDS"法检测到了纯培养菌混合物中的全部6种细菌,4种方法获得的自然沤麻菌群的DGGE指纹图谱也明显不同,最多产生17条带("冻融-蛋白酶K-SDS"法),最少只有9条带("溶菌酶-SDS"法),增加超声波或冻融等物理处理可以使部分弱带变强.因此,组合应用物理、生物和化学等细胞裂解方法可以提供更有代表性的DNA,可减少PCR-DGGE结果的偏移.
위사선화우화출교괄의적저마탈효균군DNA제취방법,본문분별이래자저마구마배경적6충순배양균등봉도혼합물화저마자연구마균군위재료,연구"용균매-SDS"법、"초성파-용균매-SDS"법、"단백매K-SDS"법이급"동융-단백매K-SDS"법4충DNA제취방법대균군16S rDNA기인PCR-DGGE편이결과적영향.결과표명,4충방법균능종2류재료중제취출료초과1 600 ng/μL적DNA,불동방법지간DNA산솔략유차이,경과초성파처리혹반복동융처리적DNA유명현적강해,단4충방법제공적DNA모판균확증출료450 bp적16S rDNA기인편단.4충DNA제취방법대DGGE결과유명현영향,차지유"동융-단백매K-SDS"법검측도료순배양균혼합물중적전부6충세균,4충방법획득적자연구마균군적DGGE지문도보야명현불동,최다산생17조대("동융-단백매K-SDS"법),최소지유9조대("용균매-SDS"법),증가초성파혹동융등물리처리가이사부분약대변강.인차,조합응용물리、생물화화학등세포렬해방법가이제공경유대표성적DNA,가감소PCR-DGGE결과적편이.