CAJ | 학술논문

本研究旨在探讨CD44基因表达抑制对白血痛多药耐药细胞株K562/A02耐药性及生物学活性的影响.根据CD44基因表达序列设计有效的RNA干扰片段,将其插入质粒表达载体中,获得针对CD44 mRNA的特异性siRNA真核质粒(pGCsiRNA-CD44),转染K562/A02细胞.用实时荧光定量RT-PCR检测K562/A02细胞CD44、mdr-1和bcl-2 mRNA的表达;用MTT法检测阿霉素对K562/A02细胞的半数抑制浓度(IC50);流式细胞术(FACS)检测细胞周期;Hochest 33258染色荧光显微镜观察细胞凋亡的形态学变化.结果表明:针对CD44基因的siRNA真核质粒可有效沉默K562/A02细胞的CD44基因:与对照组相比,转染了4条pGCsiRNA-CD44质粒的K562/A02细胞CD44表达均明显受抑,以转染了siCD44-1的细胞中抑制最强.转染pGCsiRNA-CD44质粒48小时后,K562/A02细胞CD44 mRNA表达水平下降64.1%(p<0.05),同时mdr-1与bcl-2 mRNA的表达量较对照组分别下降了25.6%与50.8%;K562/A02细胞IC50为(17.97±1.61)μg/ml,无义序列质粒转染后阿霉素对K562/A02细胞的IC50为(16.95±1.72)μg/ml,pGCsiRNA-CD44转染后IC50明显降低为(8.77±1.63)μg/ml(p<0.01).转染48小时后,G0/G1期细胞比例提高了10.7%;细胞出现核固缩、核边集、凋亡小体等改变.结论:特异性CD44 siRNA可显著抑制K562/A02细胞CD44基因的表达,抑制细胞增殖,诱导其凋亡.并有效逆转K562/A02细胞的多药耐药性.
본연구지재탐토CD44기인표체억제대백혈통다약내약세포주K562/A02내약성급생물학활성적영향.근거CD44기인표체서렬설계유효적RNA간우편단,장기삽입질립표체재체중,획득침대CD44 mRNA적특이성siRNA진핵질립(pGCsiRNA-CD44),전염K562/A02세포.용실시형광정량RT-PCR검측K562/A02세포CD44、mdr-1화bcl-2 mRNA적표체;용MTT법검측아매소대K562/A02세포적반수억제농도(IC50);류식세포술(FACS)검측세포주기;Hochest 33258염색형광현미경관찰세포조망적형태학변화.결과표명:침대CD44기인적siRNA진핵질립가유효침묵K562/A02세포적CD44기인:여대조조상비,전염료4조pGCsiRNA-CD44질립적K562/A02세포CD44표체균명현수억,이전염료siCD44-1적세포중억제최강.전염pGCsiRNA-CD44질립48소시후,K562/A02세포CD44 mRNA표체수평하강64.1%(p<0.05),동시mdr-1여bcl-2 mRNA적표체량교대조조분별하강료25.6%여50.8%;K562/A02세포IC50위(17.97±1.61)μg/ml,무의서렬질립전염후아매소대K562/A02세포적IC50위(16.95±1.72)μg/ml,pGCsiRNA-CD44전염후IC50명현강저위(8.77±1.63)μg/ml(p<0.01).전염48소시후,G0/G1기세포비례제고료10.7%;세포출현핵고축、핵변집、조망소체등개변.결론:특이성CD44 siRNA가현저억제K562/A02세포CD44기인적표체,억제세포증식,유도기조망.병유효역전K562/A02세포적다약내약성.