放射免疫学杂志
放射免疫學雜誌
방사면역학잡지
JOURNAL OF RADIOMMUNOLOGY
2009年
4期
397-399
,共3页
陈世敏%徐春晓%刘斌%辛家璇%刘贤锡
陳世敏%徐春曉%劉斌%辛傢璇%劉賢錫
진세민%서춘효%류빈%신가선%류현석
UbcH10%真核表达%siRNA
UbcH10%真覈錶達%siRNA
UbcH10%진핵표체%siRNA
目的:构建以人泛素结合酶UbcH10基因为基础的真核表达质粒pcDNA3.1(UbcH10)及其siRNA表达载体pGPU6/GFP/Neo(siRNA-UbcH10),并在结肠癌细胞LOVO中表达与鉴定.方法:提取组织总RNA,通过RT-PCR扩增出UbcH10基因,克隆到真核表达载体pcDNA3.1的多克隆位点中,构建UbcH10的真核表达载体.通过siRNA设计软件选取ubcH10基因的siRNA片段合成构建表达载体pGPU6/GFP/Neo(siPdYA-UbcH10).然后采用脂质体转染法将其分别转染LOVO细胞,用RT-PCR在RNA水平和Western Blot在蛋白水平检测其在真核细胞中的表达.结果:测序结果显示克隆UbcH10基因片段序列完全正确;重组质粒转染LO-VO细胞后,检测到pcDNA3.1(UbcH10)转染组UbcH10表达增强,而pGPU6/GFP/Neo(siRNA-UbcH10)转染组UbcH10表达减弱.结论:成功构建真核表达质粒pcDNA3.1(UbeH10)及其siRNA表达载体pGPU6/GFP/Neo(siRNA-UbcH10),并在真核细胞中能有效表达,为今后进一步研究UbcH10的功能和作用机制奠定了基础.
目的:構建以人汎素結閤酶UbcH10基因為基礎的真覈錶達質粒pcDNA3.1(UbcH10)及其siRNA錶達載體pGPU6/GFP/Neo(siRNA-UbcH10),併在結腸癌細胞LOVO中錶達與鑒定.方法:提取組織總RNA,通過RT-PCR擴增齣UbcH10基因,剋隆到真覈錶達載體pcDNA3.1的多剋隆位點中,構建UbcH10的真覈錶達載體.通過siRNA設計軟件選取ubcH10基因的siRNA片段閤成構建錶達載體pGPU6/GFP/Neo(siPdYA-UbcH10).然後採用脂質體轉染法將其分彆轉染LOVO細胞,用RT-PCR在RNA水平和Western Blot在蛋白水平檢測其在真覈細胞中的錶達.結果:測序結果顯示剋隆UbcH10基因片段序列完全正確;重組質粒轉染LO-VO細胞後,檢測到pcDNA3.1(UbcH10)轉染組UbcH10錶達增彊,而pGPU6/GFP/Neo(siRNA-UbcH10)轉染組UbcH10錶達減弱.結論:成功構建真覈錶達質粒pcDNA3.1(UbeH10)及其siRNA錶達載體pGPU6/GFP/Neo(siRNA-UbcH10),併在真覈細胞中能有效錶達,為今後進一步研究UbcH10的功能和作用機製奠定瞭基礎.
목적:구건이인범소결합매UbcH10기인위기출적진핵표체질립pcDNA3.1(UbcH10)급기siRNA표체재체pGPU6/GFP/Neo(siRNA-UbcH10),병재결장암세포LOVO중표체여감정.방법:제취조직총RNA,통과RT-PCR확증출UbcH10기인,극륭도진핵표체재체pcDNA3.1적다극륭위점중,구건UbcH10적진핵표체재체.통과siRNA설계연건선취ubcH10기인적siRNA편단합성구건표체재체pGPU6/GFP/Neo(siPdYA-UbcH10).연후채용지질체전염법장기분별전염LOVO세포,용RT-PCR재RNA수평화Western Blot재단백수평검측기재진핵세포중적표체.결과:측서결과현시극륭UbcH10기인편단서렬완전정학;중조질립전염LO-VO세포후,검측도pcDNA3.1(UbcH10)전염조UbcH10표체증강,이pGPU6/GFP/Neo(siRNA-UbcH10)전염조UbcH10표체감약.결론:성공구건진핵표체질립pcDNA3.1(UbeH10)급기siRNA표체재체pGPU6/GFP/Neo(siRNA-UbcH10),병재진핵세포중능유효표체,위금후진일보연구UbcH10적공능화작용궤제전정료기출.
