CAJ | 학술논문

提取北京油鸡心、肝、脾、肺、肾、脑、腿肌与胸肌等不同组织的总RNA,利用RT-PCR方法检测α1-酸性糖蛋白基因(α1-AGP)mRNA的差异表达.将α1-AGP基因完整开放阅读框定向插入pEGFP-C1,构建带有G即报告基因的重组表达载体pEGFP-α1-AGP,将其导入北京油鸡体外培养细胞中,并进行G418药物筛选和克隆化培养.结果表明:α1-AGP基因开放阅读框长度为612 bp,编码203个氨基酸,在北京油鸡肝、肺、腿肌和胸肌中有表达;转染后24、48和72 h,pEGFP-α1-AGP转染率在31.3%～47.6%之间,绿色荧光主要集中在细胞核中,随着表达量的增加,绿色荧光在细胞核中聚集成团块状或颗粒状,经药物筛选和克隆化培养,获得表达pEGFP-α1-AGP融合蛋白的阳性克隆细胞株,利用RT-PCR与Western blotting检测确认pEGFP-α1-AGP已整合到北京油鸡成纤维细胞的基因组中,在优化的条件下,阳性细胞凋亡率、形态、生长与增殖状况与对照组比较差异不显著(P>0.05).
제취북경유계심、간、비、폐、신、뇌、퇴기여흉기등불동조직적총RNA,이용RT-PCR방법검측α1-산성당단백기인(α1-AGP)mRNA적차이표체.장α1-AGP기인완정개방열독광정향삽입pEGFP-C1,구건대유G즉보고기인적중조표체재체pEGFP-α1-AGP,장기도입북경유계체외배양세포중,병진행G418약물사선화극륭화배양.결과표명:α1-AGP기인개방열독광장도위612 bp,편마203개안기산,재북경유계간、폐、퇴기화흉기중유표체;전염후24、48화72 h,pEGFP-α1-AGP전염솔재31.3%～47.6%지간,록색형광주요집중재세포핵중,수착표체량적증가,록색형광재세포핵중취집성단괴상혹과립상,경약물사선화극륭화배양,획득표체pEGFP-α1-AGP융합단백적양성극륭세포주,이용RT-PCR여Western blotting검측학인pEGFP-α1-AGP이정합도북경유계성섬유세포적기인조중,재우화적조건하,양성세포조망솔、형태、생장여증식상황여대조조비교차이불현저(P>0.05).