细胞与分子免疫学杂志
細胞與分子免疫學雜誌
세포여분자면역학잡지
2008年
12期
1160-1163
,共4页
黄娅琳%寇俊萍%宋佳希%余伯阳
黃婭琳%寇俊萍%宋佳希%餘伯暘
황아림%구준평%송가희%여백양
RNA%干扰%人脐静脉内皮细胞(HUVEC)%非肌肉肌球蛋白重链ⅡA(MYH9)
RNA%榦擾%人臍靜脈內皮細胞(HUVEC)%非肌肉肌毬蛋白重鏈ⅡA(MYH9)
RNA%간우%인제정맥내피세포(HUVEC)%비기육기구단백중련ⅡA(MYH9)
目的:构建人MYH9(非肌肉肌球蛋白重链ⅡA)的siRNA 表达体系,抑制原代人脐静脉内皮细胞(HUVEC)MYH9 基因的表达.方法:针对人MYH9 基因序列,构建siRNA 表达质粒,通过酶切和测序鉴定确定其序列正确性.分别转染重组质粒pGCsi-MYH9-1/2/3 至HUVEC 细胞,通过半定量RT-PCR 和蛋白质印迹,分别检测在转染后24 h、 48 h、 72 h MYH9 在mRNA 转录水平及蛋白表达的变化.结果:在构建的3种重组质粒中,pGCsi-MYH9-2、 pGCsi-MYH9-3在转染后24 h 均表现出一定的干扰作用,转染后48 h干扰作用最强,转染后72 h 干扰作用减弱;pGCsi-MYH9-3的干扰作用最明显,转染后48 h,能明显下调HUVEC 的MYH9 蛋白表达,抑制率平均可达71.2%,此时MYH9 基因mRNA 转录明显减少,抑制率为86.5%.结论:在转染后48 h pGCsi-MYH9-3 可明显抑制HUVEC 细胞内源MYH9 的表达,为进一步研究MYH9在相关疾病中的功能奠定基础.
目的:構建人MYH9(非肌肉肌毬蛋白重鏈ⅡA)的siRNA 錶達體繫,抑製原代人臍靜脈內皮細胞(HUVEC)MYH9 基因的錶達.方法:針對人MYH9 基因序列,構建siRNA 錶達質粒,通過酶切和測序鑒定確定其序列正確性.分彆轉染重組質粒pGCsi-MYH9-1/2/3 至HUVEC 細胞,通過半定量RT-PCR 和蛋白質印跡,分彆檢測在轉染後24 h、 48 h、 72 h MYH9 在mRNA 轉錄水平及蛋白錶達的變化.結果:在構建的3種重組質粒中,pGCsi-MYH9-2、 pGCsi-MYH9-3在轉染後24 h 均錶現齣一定的榦擾作用,轉染後48 h榦擾作用最彊,轉染後72 h 榦擾作用減弱;pGCsi-MYH9-3的榦擾作用最明顯,轉染後48 h,能明顯下調HUVEC 的MYH9 蛋白錶達,抑製率平均可達71.2%,此時MYH9 基因mRNA 轉錄明顯減少,抑製率為86.5%.結論:在轉染後48 h pGCsi-MYH9-3 可明顯抑製HUVEC 細胞內源MYH9 的錶達,為進一步研究MYH9在相關疾病中的功能奠定基礎.
목적:구건인MYH9(비기육기구단백중련ⅡA)적siRNA 표체체계,억제원대인제정맥내피세포(HUVEC)MYH9 기인적표체.방법:침대인MYH9 기인서렬,구건siRNA 표체질립,통과매절화측서감정학정기서렬정학성.분별전염중조질립pGCsi-MYH9-1/2/3 지HUVEC 세포,통과반정량RT-PCR 화단백질인적,분별검측재전염후24 h、 48 h、 72 h MYH9 재mRNA 전록수평급단백표체적변화.결과:재구건적3충중조질립중,pGCsi-MYH9-2、 pGCsi-MYH9-3재전염후24 h 균표현출일정적간우작용,전염후48 h간우작용최강,전염후72 h 간우작용감약;pGCsi-MYH9-3적간우작용최명현,전염후48 h,능명현하조HUVEC 적MYH9 단백표체,억제솔평균가체71.2%,차시MYH9 기인mRNA 전록명현감소,억제솔위86.5%.결론:재전염후48 h pGCsi-MYH9-3 가명현억제HUVEC 세포내원MYH9 적표체,위진일보연구MYH9재상관질병중적공능전정기출.
