CAJ | 학술논문

本研究构建3个针对小鼠Qa-1基因的小发夹RNA(shRNA)表达质粒,观察其对Qa-1基因的沉默作用,筛选出有效靶位.通过美国Ambion公司提供的siRNA web设计工具,选择3段针对Qa-1的siRNA,交由晶赛公司合成3个小发夹表达质粒,采用脂质体转染法转染NIH3T3细胞,第1、2、3组细胞分别转染3个小发夹表达质粒,第4组细胞单纯加入脂质体作为阴性对照,收集转染后24、48、72小时的细胞,用RT-PCR技术及流式细胞术对Qa-1在RNA水平的变化和细胞表面表达进行分析,筛选最有效的干扰片段.结果表明:成功构建了3个针对小鼠Qa-1的小发夹表达质粒.RT-PCR及流式细胞术检测证实,转染后3个组shRNA我体均可抑制Qa-1基因的表达,但抑制程度不一:24、48、72小时3个组细胞表面Qa-1表达减低率分别为H2-T231:60.9%,81.9%,43.6%;H2-T232为:64.5%,73.9%,61.1%;H2-T233为:61.9%,71.2%,47.5%.其中H2-T232组在3个时间点抑制作用均最明显.结论:构建的3个针对Qa-1的小发夹表达质粒均能抑制Qa-1的表达,其中H2-T232具有最有效抑制作用.
본연구구건3개침대소서Qa-1기인적소발협RNA(shRNA)표체질립,관찰기대Qa-1기인적침묵작용,사선출유효파위.통과미국Ambion공사제공적siRNA web설계공구,선택3단침대Qa-1적siRNA,교유정새공사합성3개소발협표체질립,채용지질체전염법전염NIH3T3세포,제1、2、3조세포분별전염3개소발협표체질립,제4조세포단순가입지질체작위음성대조,수집전염후24、48、72소시적세포,용RT-PCR기술급류식세포술대Qa-1재RNA수평적변화화세포표면표체진행분석,사선최유효적간우편단.결과표명:성공구건료3개침대소서Qa-1적소발협표체질립.RT-PCR급류식세포술검측증실,전염후3개조shRNA아체균가억제Qa-1기인적표체,단억제정도불일:24、48、72소시3개조세포표면Qa-1표체감저솔분별위H2-T231:60.9%,81.9%,43.6%;H2-T232위:64.5%,73.9%,61.1%;H2-T233위:61.9%,71.2%,47.5%.기중H2-T232조재3개시간점억제작용균최명현.결론:구건적3개침대Qa-1적소발협표체질립균능억제Qa-1적표체,기중H2-T232구유최유효억제작용.