复旦学报（自然科学版）
複旦學報（自然科學版）
복단학보（자연과학판）
JOURNAL OF FUDAN UNIVERSITY(NATURAL SCIENCE)
2008年
5期
553-560
,共8页
韩姬%王加龙%焦晔%刘明秋%严维耀%郑兆鑫
韓姬%王加龍%焦曄%劉明鞦%嚴維耀%鄭兆鑫
한희%왕가룡%초엽%류명추%엄유요%정조흠
FMDV%AsiaⅠ型%抗原表位%重组多肽疫苗
FMDV%AsiaⅠ型%抗原錶位%重組多肽疫苗
FMDV%AsiaⅠ형%항원표위%중조다태역묘
为了构建AsiaⅠ型口蹄疫病毒多肽疫苗,用反转录PCR方法扩增VP1基因并测得该基因的核苷酸序列.将VP1(133AA～163AA)、VP2(1AA～33AA)抗原表位基因分别与β-半乳糖苷酶基因(简称LacZ')3′末端相连构建表达质粒LacZ'-VP1和LacZ'-VP2.化学合成VP1(133AA～163AA)-VP2(1AA～33AA)-VP1(133AA～163AA) 串联重复抗原表位DNA,然后分别连接在β-半乳糖苷酶基因和IgG重链恒定区基因的3′末端,构建两种重组表达质粒LacZ'-VP1(133AA～163AA)-VP2(1AA～33AA)-VP1(133AA～163AA)(命名为pT1)和IgG-VP1(133AA～163AA)-VP2(1AA～33AA)-VP1(133AA～163AA)(命名为pT2).通过Western blot、血清中和抗体效价测定、T细胞增殖反应及豚鼠抗病毒保护实验分析所构建疫苗的免疫原性及有效性.结果显示pT1、pT2表达的融合蛋白能够诱发豚鼠产生较高的中和抗体及刺激豚鼠T细胞增殖.pT1、pT2两种融合蛋白分别2次免疫豚鼠后,100%的豚鼠能抵抗100 ID50 AsiaⅠ型口蹄疫病毒攻击.pT2融合蛋白1次免疫豚鼠后70%的豚鼠能抵抗100 ID50 AsiaⅠ型口蹄疫病毒攻击.
為瞭構建AsiaⅠ型口蹄疫病毒多肽疫苗,用反轉錄PCR方法擴增VP1基因併測得該基因的覈苷痠序列.將VP1(133AA～163AA)、VP2(1AA～33AA)抗原錶位基因分彆與β-半乳糖苷酶基因(簡稱LacZ')3′末耑相連構建錶達質粒LacZ'-VP1和LacZ'-VP2.化學閤成VP1(133AA～163AA)-VP2(1AA～33AA)-VP1(133AA～163AA) 串聯重複抗原錶位DNA,然後分彆連接在β-半乳糖苷酶基因和IgG重鏈恆定區基因的3′末耑,構建兩種重組錶達質粒LacZ'-VP1(133AA～163AA)-VP2(1AA～33AA)-VP1(133AA～163AA)(命名為pT1)和IgG-VP1(133AA～163AA)-VP2(1AA～33AA)-VP1(133AA～163AA)(命名為pT2).通過Western blot、血清中和抗體效價測定、T細胞增殖反應及豚鼠抗病毒保護實驗分析所構建疫苗的免疫原性及有效性.結果顯示pT1、pT2錶達的融閤蛋白能夠誘髮豚鼠產生較高的中和抗體及刺激豚鼠T細胞增殖.pT1、pT2兩種融閤蛋白分彆2次免疫豚鼠後,100%的豚鼠能牴抗100 ID50 AsiaⅠ型口蹄疫病毒攻擊.pT2融閤蛋白1次免疫豚鼠後70%的豚鼠能牴抗100 ID50 AsiaⅠ型口蹄疫病毒攻擊.
위료구건AsiaⅠ형구제역병독다태역묘,용반전록PCR방법확증VP1기인병측득해기인적핵감산서렬.장VP1(133AA～163AA)、VP2(1AA～33AA)항원표위기인분별여β-반유당감매기인(간칭LacZ')3′말단상련구건표체질립LacZ'-VP1화LacZ'-VP2.화학합성VP1(133AA～163AA)-VP2(1AA～33AA)-VP1(133AA～163AA) 천련중복항원표위DNA,연후분별련접재β-반유당감매기인화IgG중련항정구기인적3′말단,구건량충중조표체질립LacZ'-VP1(133AA～163AA)-VP2(1AA～33AA)-VP1(133AA～163AA)(명명위pT1)화IgG-VP1(133AA～163AA)-VP2(1AA～33AA)-VP1(133AA～163AA)(명명위pT2).통과Western blot、혈청중화항체효개측정、T세포증식반응급돈서항병독보호실험분석소구건역묘적면역원성급유효성.결과현시pT1、pT2표체적융합단백능구유발돈서산생교고적중화항체급자격돈서T세포증식.pT1、pT2량충융합단백분별2차면역돈서후,100%적돈서능저항100 ID50 AsiaⅠ형구제역병독공격.pT2융합단백1차면역돈서후70%적돈서능저항100 ID50 AsiaⅠ형구제역병독공격.
