复旦学报（自然科学版）
複旦學報（自然科學版）
복단학보（자연과학판）
JOURNAL OF FUDAN UNIVERSITY(NATURAL SCIENCE)
2008年
3期
306-310
,共5页
张彦%赵志安%王明贵%宋大新
張彥%趙誌安%王明貴%宋大新
장언%조지안%왕명귀%송대신
载脂蛋白AⅠ米兰突变体%毕赤酵母%分泌表达%优化表达
載脂蛋白AⅠ米蘭突變體%畢赤酵母%分泌錶達%優化錶達
재지단백AⅠ미란돌변체%필적효모%분비표체%우화표체
将重组质粒pPIC9K-apoAⅠ-milano用BglⅡ酶切后转化Pichia pastoris GS115菌株,筛选得到G418高抗性转化子,经甲醇诱导和摇瓶发酵,用SDS-PAGE与Western blot检测上清液,发现有明显的重组人载脂蛋白AⅠ米兰突变体(rAIM)表达,但其分子量比正常蛋白小.对酵母工程菌的摇瓶发酵条件进行优化后,rAIM表达水平得到提高, 约为70 mg/L发酵液,其中正常大小的rAIM所占的比例约为80%.采用冷丙酮沉淀法初步纯化了酵母工程菌发酵液中的rAIM,并验证其有磷脂结合能力.
將重組質粒pPIC9K-apoAⅠ-milano用BglⅡ酶切後轉化Pichia pastoris GS115菌株,篩選得到G418高抗性轉化子,經甲醇誘導和搖瓶髮酵,用SDS-PAGE與Western blot檢測上清液,髮現有明顯的重組人載脂蛋白AⅠ米蘭突變體(rAIM)錶達,但其分子量比正常蛋白小.對酵母工程菌的搖瓶髮酵條件進行優化後,rAIM錶達水平得到提高, 約為70 mg/L髮酵液,其中正常大小的rAIM所佔的比例約為80%.採用冷丙酮沉澱法初步純化瞭酵母工程菌髮酵液中的rAIM,併驗證其有燐脂結閤能力.
장중조질립pPIC9K-apoAⅠ-milano용BglⅡ매절후전화Pichia pastoris GS115균주,사선득도G418고항성전화자,경갑순유도화요병발효,용SDS-PAGE여Western blot검측상청액,발현유명현적중조인재지단백AⅠ미란돌변체(rAIM)표체,단기분자량비정상단백소.대효모공정균적요병발효조건진행우화후,rAIM표체수평득도제고, 약위70 mg/L발효액,기중정상대소적rAIM소점적비례약위80%.채용랭병동침정법초보순화료효모공정균발효액중적rAIM,병험증기유린지결합능력.
