CAJ | 학술논문

丙型肝炎病毒(HCV)与宿主细胞因子的相互作用已经成为国内外研究的热点和难点.近期研究已经证实HCV的感染对宿主多种途径中基因的转录均能产生影响.为了进一步研究究竟是HCV中的哪些功能基因在与特定细胞因子的相互作用中起主导作用,构建了分别含有HCV Core、E1、E2、p7、NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A和NS5B基因的真核表达质粒,分别转入宿主细胞CHO-K1中,在G418的选择压力下筛选获得稳定表达HCV单个蛋白的细胞系(10株).PCR和RT-PCR可分别从稳定细胞系中检测到相应的HCV基因的DNA和mRNA,冻存和复苏不会造成HCV基因的丢失.Western-blot检测到稳定细胞系中表达E1,E2和NS5B蛋白,说明HCV基因在CHO-K1中已经形成稳定表达.薄层层析(TLC)结果显示,含有不同HCV基因的稳定传代细胞系中,UDP-葡萄糖神经酰胺葡萄糖基转移酶(UGCG)活性均发生了不同程度的变化,其中E2和p7的表达使胞内UGCG的活性提高了约1倍,NS2和NS5A则使UGCG的酶活提高了约0.6倍.该稳定细胞系的建立为研究病毒与宿主因子的相互作用及药物筛选奠定了基础.
병형간염병독(HCV)여숙주세포인자적상호작용이경성위국내외연구적열점화난점.근기연구이경증실HCV적감염대숙주다충도경중기인적전록균능산생영향.위료진일보연구구경시HCV중적나사공능기인재여특정세포인자적상호작용중기주도작용,구건료분별함유HCV Core、E1、E2、p7、NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A화NS5B기인적진핵표체질립,분별전입숙주세포CHO-K1중,재G418적선택압력하사선획득은정표체HCV단개단백적세포계(10주).PCR화RT-PCR가분별종은정세포계중검측도상응적HCV기인적DNA화mRNA,동존화복소불회조성HCV기인적주실.Western-blot검측도은정세포계중표체E1,E2화NS5B단백,설명HCV기인재CHO-K1중이경형성은정표체.박층층석(TLC)결과현시,함유불동HCV기인적은정전대세포계중,UDP-포도당신경선알포도당기전이매(UGCG)활성균발생료불동정도적변화,기중E2화p7적표체사포내UGCG적활성제고료약1배,NS2화NS5A칙사UGCG적매활제고료약0.6배.해은정세포계적건립위연구병독여숙주인자적상호작용급약물사선전정료기출.