生物工程学报
生物工程學報
생물공정학보
CHINESE JOURNAL OF BIOTECHNOLOGY
2007年
5期
915-918
,共4页
田博%吴彬%张群伟%毕建进%王澜%朱宝珍%耿越%吴祖泽
田博%吳彬%張群偉%畢建進%王瀾%硃寶珍%耿越%吳祖澤
전박%오빈%장군위%필건진%왕란%주보진%경월%오조택
悬浮培养%重组腺病毒%HEK-293 N3S细胞%生物反应器
懸浮培養%重組腺病毒%HEK-293 N3S細胞%生物反應器
현부배양%중조선병독%HEK-293 N3S세포%생물반응기
利用5L生物反应器悬浮培养HEK-293 N3S细胞生产携带绿色荧光蛋白基因的重组腺病毒(recombinant adenovirusgreen fluorescent protein,Ad-GFP),为规模化生产腺病毒基因药物建立一种稳定可行的生产工艺.复苏的种子细胞进行逐级放大最后接入5L搅拌式生物反应器中,采用含5%胎牛血清(FBS)的DMEM/F12培基灌流培养293 N3S细胞,当细胞密度达到(2～4)× 106个/mL时感染Ad-GFP,48h后收获细胞,经两步氯化铯超速离心获得纯化的Ad-GFP.采用紫外分光光度计比色法和高压液相色谱法(HPLC)测定病毒颗粒数和纯度,采用组织培养半数感染剂量(TCID5o)法检测腺病毒的感染滴度.连续培养10～12d,细胞密度可达到(2～4)×106个/mL左右,纯化的Ad-GFP感染滴度和颗粒数分别为1.0×1011IU/mL和1.68×1012VP/mL,比活性为6.0%,A260/A280比值为1.33,产品纯度达到99.2%.建立了5L生物反应器悬浮培养293 N3S细胞生产重组腺病毒Ad-GFP的生产工艺,对携带其他基因的重组腺病毒药物生产具有一定的指导意义.
利用5L生物反應器懸浮培養HEK-293 N3S細胞生產攜帶綠色熒光蛋白基因的重組腺病毒(recombinant adenovirusgreen fluorescent protein,Ad-GFP),為規模化生產腺病毒基因藥物建立一種穩定可行的生產工藝.複囌的種子細胞進行逐級放大最後接入5L攪拌式生物反應器中,採用含5%胎牛血清(FBS)的DMEM/F12培基灌流培養293 N3S細胞,噹細胞密度達到(2～4)× 106箇/mL時感染Ad-GFP,48h後收穫細胞,經兩步氯化銫超速離心穫得純化的Ad-GFP.採用紫外分光光度計比色法和高壓液相色譜法(HPLC)測定病毒顆粒數和純度,採用組織培養半數感染劑量(TCID5o)法檢測腺病毒的感染滴度.連續培養10～12d,細胞密度可達到(2～4)×106箇/mL左右,純化的Ad-GFP感染滴度和顆粒數分彆為1.0×1011IU/mL和1.68×1012VP/mL,比活性為6.0%,A260/A280比值為1.33,產品純度達到99.2%.建立瞭5L生物反應器懸浮培養293 N3S細胞生產重組腺病毒Ad-GFP的生產工藝,對攜帶其他基因的重組腺病毒藥物生產具有一定的指導意義.
이용5L생물반응기현부배양HEK-293 N3S세포생산휴대록색형광단백기인적중조선병독(recombinant adenovirusgreen fluorescent protein,Ad-GFP),위규모화생산선병독기인약물건립일충은정가행적생산공예.복소적충자세포진행축급방대최후접입5L교반식생물반응기중,채용함5%태우혈청(FBS)적DMEM/F12배기관류배양293 N3S세포,당세포밀도체도(2～4)× 106개/mL시감염Ad-GFP,48h후수획세포,경량보록화색초속리심획득순화적Ad-GFP.채용자외분광광도계비색법화고압액상색보법(HPLC)측정병독과립수화순도,채용조직배양반수감염제량(TCID5o)법검측선병독적감염적도.련속배양10～12d,세포밀도가체도(2～4)×106개/mL좌우,순화적Ad-GFP감염적도화과립수분별위1.0×1011IU/mL화1.68×1012VP/mL,비활성위6.0%,A260/A280비치위1.33,산품순도체도99.2%.건립료5L생물반응기현부배양293 N3S세포생산중조선병독Ad-GFP적생산공예,대휴대기타기인적중조선병독약물생산구유일정적지도의의.
