中国修复重建外科杂志
中國脩複重建外科雜誌
중국수복중건외과잡지
CHINESE JOURNAL OF REPARATIVE AND RECONSTRUCTIVE SURGERY
2007年
1期
81-85
,共5页
田新%符仁义%邓力%智伟%周晨燕%郭霞%朱易萍%雷明雨%李世均
田新%符仁義%鄧力%智偉%週晨燕%郭霞%硃易萍%雷明雨%李世均
전신%부인의%산력%지위%주신연%곽하%주역평%뢰명우%리세균
新生儿%脐血间充质干细胞%诱导分化
新生兒%臍血間充質榦細胞%誘導分化
신생인%제혈간충질간세포%유도분화
目的 探讨新生儿脐血间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)体外分离、纯化、扩增,以及向成骨及脂肪细胞定向诱导分化的方法与条件.方法 无菌条件下收集新生儿脐血60～120 ml,枸橼酸钠抗凝,以Ficoll-Hypaque 淋巴细胞分离液密度梯度法、沉降红细胞后密度梯度法及CD34+免疫磁珠负选法分离单个核细胞(mononuclear cells,MNCs).分离获得的MNCs采用L-DMEM培养基或MesencultTM培养基/10%胎牛血清进行MSCs培养传代,获得第3代集落生长细胞作流式细胞仪表面抗原测定,并向成骨及脂肪细胞定向诱导分化,成骨细胞钙沉积经茜素红染色鉴定,脂肪细胞胞浆油滴经油红染色鉴定.结果 经沉降红细胞后分离的MNCs,使用MesencultTM培养基/10%胎牛血清培养成功率高,第3代可出现明显的集落生长,而另两种方法分离培养的细胞则难以形成集落;集落细胞表面抗原测定表达CD29、CD59、CD71而不表达CD34、CD45及HLA-DR等分子.成骨定向诱导分化的集落细胞经茜素红染色胞浆中出现有大量的钙沉积;成脂肪定向诱导分化的集落细胞油红染色示胞浆充满油滴空泡.结论 新生儿脐血中可分离出MSCs,并可在体外进行培养扩增.以甲基纤维素沉降红细胞后密度梯度离心分离的MNCs培养较为有效,集落细胞表达基质细胞表面抗原,能够向成骨细胞及成脂肪细胞定向诱导分化.
目的 探討新生兒臍血間充質榦細胞(mesenchymal stem cells,MSCs)體外分離、純化、擴增,以及嚮成骨及脂肪細胞定嚮誘導分化的方法與條件.方法 無菌條件下收集新生兒臍血60～120 ml,枸櫞痠鈉抗凝,以Ficoll-Hypaque 淋巴細胞分離液密度梯度法、沉降紅細胞後密度梯度法及CD34+免疫磁珠負選法分離單箇覈細胞(mononuclear cells,MNCs).分離穫得的MNCs採用L-DMEM培養基或MesencultTM培養基/10%胎牛血清進行MSCs培養傳代,穫得第3代集落生長細胞作流式細胞儀錶麵抗原測定,併嚮成骨及脂肪細胞定嚮誘導分化,成骨細胞鈣沉積經茜素紅染色鑒定,脂肪細胞胞漿油滴經油紅染色鑒定.結果 經沉降紅細胞後分離的MNCs,使用MesencultTM培養基/10%胎牛血清培養成功率高,第3代可齣現明顯的集落生長,而另兩種方法分離培養的細胞則難以形成集落;集落細胞錶麵抗原測定錶達CD29、CD59、CD71而不錶達CD34、CD45及HLA-DR等分子.成骨定嚮誘導分化的集落細胞經茜素紅染色胞漿中齣現有大量的鈣沉積;成脂肪定嚮誘導分化的集落細胞油紅染色示胞漿充滿油滴空泡.結論 新生兒臍血中可分離齣MSCs,併可在體外進行培養擴增.以甲基纖維素沉降紅細胞後密度梯度離心分離的MNCs培養較為有效,集落細胞錶達基質細胞錶麵抗原,能夠嚮成骨細胞及成脂肪細胞定嚮誘導分化.
목적 탐토신생인제혈간충질간세포(mesenchymal stem cells,MSCs)체외분리、순화、확증,이급향성골급지방세포정향유도분화적방법여조건.방법 무균조건하수집신생인제혈60～120 ml,구연산납항응,이Ficoll-Hypaque 림파세포분리액밀도제도법、침강홍세포후밀도제도법급CD34+면역자주부선법분리단개핵세포(mononuclear cells,MNCs).분리획득적MNCs채용L-DMEM배양기혹MesencultTM배양기/10%태우혈청진행MSCs배양전대,획득제3대집락생장세포작류식세포의표면항원측정,병향성골급지방세포정향유도분화,성골세포개침적경천소홍염색감정,지방세포포장유적경유홍염색감정.결과 경침강홍세포후분리적MNCs,사용MesencultTM배양기/10%태우혈청배양성공솔고,제3대가출현명현적집락생장,이령량충방법분리배양적세포칙난이형성집락;집락세포표면항원측정표체CD29、CD59、CD71이불표체CD34、CD45급HLA-DR등분자.성골정향유도분화적집락세포경천소홍염색포장중출현유대량적개침적;성지방정향유도분화적집락세포유홍염색시포장충만유적공포.결론 신생인제혈중가분리출MSCs,병가재체외진행배양확증.이갑기섬유소침강홍세포후밀도제도리심분리적MNCs배양교위유효,집락세포표체기질세포표면항원,능구향성골세포급성지방세포정향유도분화.
