畜牧兽医学报
畜牧獸醫學報
축목수의학보
2006年
4期
412-416
,共5页
乔军%夏咸柱%杨松涛%郝峰%高玉伟%郑晓一%黄耕
喬軍%夏鹹柱%楊鬆濤%郝峰%高玉偉%鄭曉一%黃耕
교군%하함주%양송도%학봉%고옥위%정효일%황경
犬冠状病毒%基因疫苗表达载体%构建%免疫原性
犬冠狀病毒%基因疫苗錶達載體%構建%免疫原性
견관상병독%기인역묘표체재체%구건%면역원성
以pVAX1为载体首次构建了犬冠状病毒病基因的3种真核表达质粒.首先将犬冠状病毒大熊猫株(CCVDXMV)纤突蛋白(S)、膜蛋白(M)和核蛋白(N)基因进行了克隆和序列测定.将测序后的质粒pTS、pTM和pTN分别双酶切,回收目的基因片段并将其定向克隆到真核表达质粒pVAX1中得到重组质粒pVAXS、pVAXM和pVAXN.将这3种真核表达质粒通过脂质体介导法转染MDCK细胞,通过RT-PCR法进行转录水平的检测,并用间接ELISA法检测目的蛋白的表达情况.结果在pVAXS、pVAXM、pVAXN转染MDCK细胞36 h后就可检测到目的基因的转录;在转染72 h后可检测到3种目的蛋白的表达.动物免疫试验表明,3种真核表达载体能有效地诱导机体产生细胞免疫与体液免疫应答,这为CCV基因疫苗的研究奠定了良好的基础.
以pVAX1為載體首次構建瞭犬冠狀病毒病基因的3種真覈錶達質粒.首先將犬冠狀病毒大熊貓株(CCVDXMV)纖突蛋白(S)、膜蛋白(M)和覈蛋白(N)基因進行瞭剋隆和序列測定.將測序後的質粒pTS、pTM和pTN分彆雙酶切,迴收目的基因片段併將其定嚮剋隆到真覈錶達質粒pVAX1中得到重組質粒pVAXS、pVAXM和pVAXN.將這3種真覈錶達質粒通過脂質體介導法轉染MDCK細胞,通過RT-PCR法進行轉錄水平的檢測,併用間接ELISA法檢測目的蛋白的錶達情況.結果在pVAXS、pVAXM、pVAXN轉染MDCK細胞36 h後就可檢測到目的基因的轉錄;在轉染72 h後可檢測到3種目的蛋白的錶達.動物免疫試驗錶明,3種真覈錶達載體能有效地誘導機體產生細胞免疫與體液免疫應答,這為CCV基因疫苗的研究奠定瞭良好的基礎.
이pVAX1위재체수차구건료견관상병독병기인적3충진핵표체질립.수선장견관상병독대웅묘주(CCVDXMV)섬돌단백(S)、막단백(M)화핵단백(N)기인진행료극륭화서렬측정.장측서후적질립pTS、pTM화pTN분별쌍매절,회수목적기인편단병장기정향극륭도진핵표체질립pVAX1중득도중조질립pVAXS、pVAXM화pVAXN.장저3충진핵표체질립통과지질체개도법전염MDCK세포,통과RT-PCR법진행전록수평적검측,병용간접ELISA법검측목적단백적표체정황.결과재pVAXS、pVAXM、pVAXN전염MDCK세포36 h후취가검측도목적기인적전록;재전염72 h후가검측도3충목적단백적표체.동물면역시험표명,3충진핵표체재체능유효지유도궤체산생세포면역여체액면역응답,저위CCV기인역묘적연구전정료량호적기출.
