生物工程学报
生物工程學報
생물공정학보
CHINESE JOURNAL OF BIOTECHNOLOGY
2006年
2期
198-203
,共6页
刘礼兵%刘云%何华庆%李永辉%徐琪寿
劉禮兵%劉雲%何華慶%李永輝%徐琪壽
류례병%류운%하화경%리영휘%서기수
qa-3%密码子%mRNA二级结构%奎尼酸脱氢酶
qa-3%密碼子%mRNA二級結構%奎尼痠脫氫酶
qa-3%밀마자%mRNA이급결구%규니산탈경매
奎尼酸脱氢酶的高表达是奎尼酸生物合成的代谢工程研究的的基因qa-3在大肠杆菌中不表达,根据大肠杆菌密码子使用频率分析qa-3基因,发现有27个稀有密码子,其中编码Arg(R)的有8个,编码Gly(G)的有9个.编码精氨酸的AGG(AGA)两个稀有密码子紧密相连(R区),另外还有个相对比较集中的GGG密集区G区.进一步通过计算机分析其qa-3基因mRNA二级结构,发现改变5′和3′末端个别碱基对其二级结构的影响很大,可以使mRNA的自由能由野生型的-374.3 kJ/mol降低到最小-80.5 kJ/mol,从而大大减少mRNA两端二级结构的产生,而仅仅改变R区和G区的稀有密码子自由能变化很小.通过对该基因密码子改造和优化5′和3′末端对其mRNA二级结构的影响,在大肠杆菌中表达真菌的基因qa-3,并测到了奎尼酸脱氢酶活性,为构建产奎尼酸工程菌株奠定基础.
奎尼痠脫氫酶的高錶達是奎尼痠生物閤成的代謝工程研究的的基因qa-3在大腸桿菌中不錶達,根據大腸桿菌密碼子使用頻率分析qa-3基因,髮現有27箇稀有密碼子,其中編碼Arg(R)的有8箇,編碼Gly(G)的有9箇.編碼精氨痠的AGG(AGA)兩箇稀有密碼子緊密相連(R區),另外還有箇相對比較集中的GGG密集區G區.進一步通過計算機分析其qa-3基因mRNA二級結構,髮現改變5′和3′末耑箇彆堿基對其二級結構的影響很大,可以使mRNA的自由能由野生型的-374.3 kJ/mol降低到最小-80.5 kJ/mol,從而大大減少mRNA兩耑二級結構的產生,而僅僅改變R區和G區的稀有密碼子自由能變化很小.通過對該基因密碼子改造和優化5′和3′末耑對其mRNA二級結構的影響,在大腸桿菌中錶達真菌的基因qa-3,併測到瞭奎尼痠脫氫酶活性,為構建產奎尼痠工程菌株奠定基礎.
규니산탈경매적고표체시규니산생물합성적대사공정연구적적기인qa-3재대장간균중불표체,근거대장간균밀마자사용빈솔분석qa-3기인,발현유27개희유밀마자,기중편마Arg(R)적유8개,편마Gly(G)적유9개.편마정안산적AGG(AGA)량개희유밀마자긴밀상련(R구),령외환유개상대비교집중적GGG밀집구G구.진일보통과계산궤분석기qa-3기인mRNA이급결구,발현개변5′화3′말단개별감기대기이급결구적영향흔대,가이사mRNA적자유능유야생형적-374.3 kJ/mol강저도최소-80.5 kJ/mol,종이대대감소mRNA량단이급결구적산생,이부부개변R구화G구적희유밀마자자유능변화흔소.통과대해기인밀마자개조화우화5′화3′말단대기mRNA이급결구적영향,재대장간균중표체진균적기인qa-3,병측도료규니산탈경매활성,위구건산규니산공정균주전정기출.
