吉林大学学报（医学版）
吉林大學學報（醫學版）
길림대학학보（의학판）
JOURNAL OF JILIN UNIVERSITY(MEDICINE EDITION)
2006年
2期
203-206
,共4页
李明辉%谭岩%姜艳芳%刘力华%方艳秋%许淑芬%段秀梅%付嘉
李明輝%譚巖%薑豔芳%劉力華%方豔鞦%許淑芬%段秀梅%付嘉
리명휘%담암%강염방%류력화%방염추%허숙분%단수매%부가
人β2GPⅠ%遗传载体%基因表达
人β2GPⅠ%遺傳載體%基因錶達
인β2GPⅠ%유전재체%기인표체
目的:构建hβ2GPⅠ(hβ2GPⅠ)第一功能区基因单体及二串联体的原核表达载体PQE30-β2GPI-DI和PQE30-β2GPⅠ-DI2,并在大肠杆菌M15中进行高效表达.方法:应用PCR技术扩增hβ2GPⅠ第一功能区基因的单体β2GPⅠ-DI,并根据同尾酶特性构建hβ2GPⅠ第一功能区基因二串联体β2GPⅠ-DI2,将获得的单体和二串联体分别与PGEM-T easy载体连接测序,测序正确后分别克隆于原核表达载体PQE30中,构建成重组表达载体PQE30-β2GPⅠ-DI和PQE30-β2GP Ⅰ-DI2,在大肠杆菌M15中以l mmol·L-1IPTG诱导蛋白表达,经Western blotting鉴定目的蛋白的抗原性.结果:表达了hβ2GPⅠ第一功能区基因的单体及二串联体的蛋白,相对分子质量约为9 000和17 000,其表达量均可达菌体总蛋白的25%,并具有hβ2GPⅠ的抗原性.结论:成功构建了hβ2GPⅠ第一功能区基因的单体及二串联体的原核表达载体,并诱导了蛋白的高效表达.
目的:構建hβ2GPⅠ(hβ2GPⅠ)第一功能區基因單體及二串聯體的原覈錶達載體PQE30-β2GPI-DI和PQE30-β2GPⅠ-DI2,併在大腸桿菌M15中進行高效錶達.方法:應用PCR技術擴增hβ2GPⅠ第一功能區基因的單體β2GPⅠ-DI,併根據同尾酶特性構建hβ2GPⅠ第一功能區基因二串聯體β2GPⅠ-DI2,將穫得的單體和二串聯體分彆與PGEM-T easy載體連接測序,測序正確後分彆剋隆于原覈錶達載體PQE30中,構建成重組錶達載體PQE30-β2GPⅠ-DI和PQE30-β2GP Ⅰ-DI2,在大腸桿菌M15中以l mmol·L-1IPTG誘導蛋白錶達,經Western blotting鑒定目的蛋白的抗原性.結果:錶達瞭hβ2GPⅠ第一功能區基因的單體及二串聯體的蛋白,相對分子質量約為9 000和17 000,其錶達量均可達菌體總蛋白的25%,併具有hβ2GPⅠ的抗原性.結論:成功構建瞭hβ2GPⅠ第一功能區基因的單體及二串聯體的原覈錶達載體,併誘導瞭蛋白的高效錶達.
목적:구건hβ2GPⅠ(hβ2GPⅠ)제일공능구기인단체급이천련체적원핵표체재체PQE30-β2GPI-DI화PQE30-β2GPⅠ-DI2,병재대장간균M15중진행고효표체.방법:응용PCR기술확증hβ2GPⅠ제일공능구기인적단체β2GPⅠ-DI,병근거동미매특성구건hβ2GPⅠ제일공능구기인이천련체β2GPⅠ-DI2,장획득적단체화이천련체분별여PGEM-T easy재체련접측서,측서정학후분별극륭우원핵표체재체PQE30중,구건성중조표체재체PQE30-β2GPⅠ-DI화PQE30-β2GP Ⅰ-DI2,재대장간균M15중이l mmol·L-1IPTG유도단백표체,경Western blotting감정목적단백적항원성.결과:표체료hβ2GPⅠ제일공능구기인적단체급이천련체적단백,상대분자질량약위9 000화17 000,기표체량균가체균체총단백적25%,병구유hβ2GPⅠ적항원성.결론:성공구건료hβ2GPⅠ제일공능구기인적단체급이천련체적원핵표체재체,병유도료단백적고효표체.
