中国病毒学
中國病毒學
중국병독학
VIROLOGICA SINICA
2004年
5期
476-480
,共5页
乐敏%邱德新%陈焕春%蒋增海
樂敏%邱德新%陳煥春%蔣增海
악민%구덕신%진환춘%장증해
猪繁殖与呼吸综合征病毒%orf7%orf5%双基因原核表达
豬繁殖與呼吸綜閤徵病毒%orf7%orf5%雙基因原覈錶達
저번식여호흡종합정병독%orf7%orf5%쌍기인원핵표체
根据PRRSV已知序列设计两对引物,采用RT-PCR方法分别扩增orr7和orf5基因片段.利用EcoRI、SpeⅠ和Hind Ⅲ位点将orf7和orf5基因片段依次克隆到pMD-18T载体,构建成重组质粒pMD18NE,并比较所克隆基因序列的同源性.将串联的orf7和orf5基因亚克隆到原核表达载体pGEX-KG,构建重组原核融合表达质粒pGEX-KGNE,并转化BL21,SDS-PAGE和Western-blot分析表明:orf7和orf5基因与GST获得了融合表达,并且表达的融合蛋白GST-NE具有免疫学反应活性,这为猪繁殖与呼吸综合征血清学诊断方法的建立及疫苗研究打下基础.
根據PRRSV已知序列設計兩對引物,採用RT-PCR方法分彆擴增orr7和orf5基因片段.利用EcoRI、SpeⅠ和Hind Ⅲ位點將orf7和orf5基因片段依次剋隆到pMD-18T載體,構建成重組質粒pMD18NE,併比較所剋隆基因序列的同源性.將串聯的orf7和orf5基因亞剋隆到原覈錶達載體pGEX-KG,構建重組原覈融閤錶達質粒pGEX-KGNE,併轉化BL21,SDS-PAGE和Western-blot分析錶明:orf7和orf5基因與GST穫得瞭融閤錶達,併且錶達的融閤蛋白GST-NE具有免疫學反應活性,這為豬繁殖與呼吸綜閤徵血清學診斷方法的建立及疫苗研究打下基礎.
근거PRRSV이지서렬설계량대인물,채용RT-PCR방법분별확증orr7화orf5기인편단.이용EcoRI、SpeⅠ화Hind Ⅲ위점장orf7화orf5기인편단의차극륭도pMD-18T재체,구건성중조질립pMD18NE,병비교소극륭기인서렬적동원성.장천련적orf7화orf5기인아극륭도원핵표체재체pGEX-KG,구건중조원핵융합표체질립pGEX-KGNE,병전화BL21,SDS-PAGE화Western-blot분석표명:orf7화orf5기인여GST획득료융합표체,병차표체적융합단백GST-NE구유면역학반응활성,저위저번식여호흡종합정혈청학진단방법적건립급역묘연구타하기출.
