CAJ | 학술논문

Notch信号通路在调控造血干细胞的增殖分化中具有重要作用.本研究克隆表达人Notch配体Delta-like-1(Dll-1)的胞外区(hDll-1ext),并观察其对脐带血造血祖细胞的扩增作用.从人骨髓单个核细胞中提取总RNA,用RT-PCR的方法扩增Delta-like-1基因胞外区,克隆到T载体.测序正确后,亚克隆到pcDNA3.1/Myc-His(+)A表达载体.用脂质体转染CHO细胞,G418筛选单克隆,Western印迹检测hDll-1ext的分泌表达情况.选择表达量高的细胞克隆,扩增并收集上清.用金属亲和层析柱从上清中纯化融合蛋白hDlll-1ext.利用免疫磁性分离方法分离脐带血CD34+细胞.结果表明,RT-PCR方法检测到脐带血CD34+细胞表达Notch-1受体.在含rhIL-3,rhSCF及rhVEGF的脐带血CD34+细胞无血清培养体系中,加入纯化的hDll-1ext,通过集落培养检测hDl-1ext对造血祖细胞的扩增作用.含hDll-1ext组中CFU-Mix和HPP-CFC数量是对照组的1.5倍,结论:重组的hDll-1ext对原始的造血祖细胞具有扩增作用.
Notch신호통로재조공조혈간세포적증식분화중구유중요작용.본연구극륭표체인Notch배체Delta-like-1(Dll-1)적포외구(hDll-1ext),병관찰기대제대혈조혈조세포적확증작용.종인골수단개핵세포중제취총RNA,용RT-PCR적방법확증Delta-like-1기인포외구,극륭도T재체.측서정학후,아극륭도pcDNA3.1/Myc-His(+)A표체재체.용지질체전염CHO세포,G418사선단극륭,Western인적검측hDll-1ext적분비표체정황.선택표체량고적세포극륭,확증병수집상청.용금속친화층석주종상청중순화융합단백hDlll-1ext.이용면역자성분리방법분리제대혈CD34+세포.결과표명,RT-PCR방법검측도제대혈CD34+세포표체Notch-1수체.재함rhIL-3,rhSCF급rhVEGF적제대혈CD34+세포무혈청배양체계중,가입순화적hDll-1ext,통과집락배양검측hDl-1ext대조혈조세포적확증작용.함hDll-1ext조중CFU-Mix화HPP-CFC수량시대조조적1.5배,결론:중조적hDll-1ext대원시적조혈조세포구유확증작용.