中国生物化学与分子生物学报
中國生物化學與分子生物學報
중국생물화학여분자생물학보
CHINESE JOURNAL OF BIOCHEMISTRY AND MOLECULAR BIOLOGY
2000年
3期
335-339
,共5页
袁静明%李卓玉%王雅梅%徐明群
袁靜明%李卓玉%王雅梅%徐明群
원정명%리탁옥%왕아매%서명군
人神经营养因子-3%内蛋白子%融合蛋白%DTT剪切
人神經營養因子-3%內蛋白子%融閤蛋白%DTT剪切
인신경영양인자-3%내단백자%융합단백%DTT전절
将人神经营养因子-3(hNT3)基因插入含内蛋白子-几丁质结合区(Intein-CBD)片段的质粒pTXB1的多克隆位点,构建成重组子pTXB-hNT3,随后转化入E.coli 2566并进行融合表达.表达产物包涵体经8 mol/L脲变性,并在GSH,GSSG存在下复性.复性后的融合蛋白经几丁质珠亲和柱吸附.待洗涤杂蛋白后,加入50 mmol/L DTT在4℃或25℃进行剪切反应48 h,再用缓冲液洗脱,即得hNT3.SDS-PAGE分析表明,hNT3达电泳纯.其分子量约为14 kD.
將人神經營養因子-3(hNT3)基因插入含內蛋白子-幾丁質結閤區(Intein-CBD)片段的質粒pTXB1的多剋隆位點,構建成重組子pTXB-hNT3,隨後轉化入E.coli 2566併進行融閤錶達.錶達產物包涵體經8 mol/L脲變性,併在GSH,GSSG存在下複性.複性後的融閤蛋白經幾丁質珠親和柱吸附.待洗滌雜蛋白後,加入50 mmol/L DTT在4℃或25℃進行剪切反應48 h,再用緩遲液洗脫,即得hNT3.SDS-PAGE分析錶明,hNT3達電泳純.其分子量約為14 kD.
장인신경영양인자-3(hNT3)기인삽입함내단백자-궤정질결합구(Intein-CBD)편단적질립pTXB1적다극륭위점,구건성중조자pTXB-hNT3,수후전화입E.coli 2566병진행융합표체.표체산물포함체경8 mol/L뇨변성,병재GSH,GSSG존재하복성.복성후적융합단백경궤정질주친화주흡부.대세조잡단백후,가입50 mmol/L DTT재4℃혹25℃진행전절반응48 h,재용완충액세탈,즉득hNT3.SDS-PAGE분석표명,hNT3체전영순.기분자량약위14 kD.
