中国病毒学
中國病毒學
중국병독학
VIROLOGICA SINICA
2000年
2期
116-121
,共6页
童贻刚%杜勇%徐静%李敬云%鲁晏希%鲍作义%王海涛
童貽剛%杜勇%徐靜%李敬雲%魯晏希%鮑作義%王海濤
동이강%두용%서정%리경운%로안희%포작의%왕해도
人类免疫缺陷病毒Ⅰ型(HIV-1)%p24蛋白%基因表达%大肠杆菌
人類免疫缺陷病毒Ⅰ型(HIV-1)%p24蛋白%基因錶達%大腸桿菌
인류면역결함병독Ⅰ형(HIV-1)%p24단백%기인표체%대장간균
合成引物扩增HIV-1 p24基因,并将其克隆到pQE-30质粒中,使其在大肠杆菌E.coli M15中以IPTG诱导高效表达,经SDS-PAGE分析,该表达产物约占菌体总蛋白20%,并且以可溶蛋白的形式存在于细菌裂解液上清之中.经镍离子柱亲和层析一步纯化,洗脱产物中p24蛋白纯度达95%.ELISA分析表明,该蛋白可与HIV感染者血清发生特异性免疫反应.以此蛋白交联Sepharose 4B,亲和层析纯化HIV感染者血清中的抗体,用所得抗体与HIV确认试剂反应,发现该纯化抗体仅与确认试剂中的p24蛋白反应.上述结果表明在大肠杆菌中已经高效表达了可溶性HIV-1 p24蛋白,该蛋白具有良好的抗原性.
閤成引物擴增HIV-1 p24基因,併將其剋隆到pQE-30質粒中,使其在大腸桿菌E.coli M15中以IPTG誘導高效錶達,經SDS-PAGE分析,該錶達產物約佔菌體總蛋白20%,併且以可溶蛋白的形式存在于細菌裂解液上清之中.經鎳離子柱親和層析一步純化,洗脫產物中p24蛋白純度達95%.ELISA分析錶明,該蛋白可與HIV感染者血清髮生特異性免疫反應.以此蛋白交聯Sepharose 4B,親和層析純化HIV感染者血清中的抗體,用所得抗體與HIV確認試劑反應,髮現該純化抗體僅與確認試劑中的p24蛋白反應.上述結果錶明在大腸桿菌中已經高效錶達瞭可溶性HIV-1 p24蛋白,該蛋白具有良好的抗原性.
합성인물확증HIV-1 p24기인,병장기극륭도pQE-30질립중,사기재대장간균E.coli M15중이IPTG유도고효표체,경SDS-PAGE분석,해표체산물약점균체총단백20%,병차이가용단백적형식존재우세균렬해액상청지중.경얼리자주친화층석일보순화,세탈산물중p24단백순도체95%.ELISA분석표명,해단백가여HIV감염자혈청발생특이성면역반응.이차단백교련Sepharose 4B,친화층석순화HIV감염자혈청중적항체,용소득항체여HIV학인시제반응,발현해순화항체부여학인시제중적p24단백반응.상술결과표명재대장간균중이경고효표체료가용성HIV-1 p24단백,해단백구유량호적항원성.
