北京大学学报（自然科学版）
北京大學學報（自然科學版）
북경대학학보（자연과학판）
ACTA SCIENTIARUM NATURALIUM UNIVERSITATIS PEKINENSIS
2000年
4期
489-494
,共6页
高新胜%黄仪秀%郭振泉%朱圣庚%陈玉珍
高新勝%黃儀秀%郭振泉%硃聖庚%陳玉珍
고신성%황의수%곽진천%주골경%진옥진
噬菌体展示技术%抗体库%单链抗体%神经肽%亲和淘选
噬菌體展示技術%抗體庫%單鏈抗體%神經肽%親和淘選
서균체전시기술%항체고%단련항체%신경태%친화도선
成功构建一库容量为1.7×108的小鼠噬菌体抗体库,并从中淘选出对N-肽有结合活性的单链抗体.首先从未免疫小鼠的脾脏中提取总RNA,分离出mRNA,经逆转录合成其总cDNA.随后通过PCR分别扩增出抗体重链和轻链可变区VH、VL的基因片断,再经重组PCR将两片断由一编码(Gly4Ser)3十五肽的接头连在一起,并克隆到噬菌质粒pCANTAB 5E中,电击转化大肠杆菌TG1.经辅助噬菌体M13KO7超感染回收全部重组噬菌体,此即噬菌体抗体库.N-肽是一种新发现的神经肽,其N端与阿片肽高度同源,可与阿片肽受体相互作用.对其研究可能有助于了解成瘾机制和有临床应用价值.将生物素化的N-肽与抗体库相互作用,用偶联有链霉亲和素的磁珠富集与N-肽结合的重组噬菌体,经四轮淘选,得到亲和力较高的单链抗体.
成功構建一庫容量為1.7×108的小鼠噬菌體抗體庫,併從中淘選齣對N-肽有結閤活性的單鏈抗體.首先從未免疫小鼠的脾髒中提取總RNA,分離齣mRNA,經逆轉錄閤成其總cDNA.隨後通過PCR分彆擴增齣抗體重鏈和輕鏈可變區VH、VL的基因片斷,再經重組PCR將兩片斷由一編碼(Gly4Ser)3十五肽的接頭連在一起,併剋隆到噬菌質粒pCANTAB 5E中,電擊轉化大腸桿菌TG1.經輔助噬菌體M13KO7超感染迴收全部重組噬菌體,此即噬菌體抗體庫.N-肽是一種新髮現的神經肽,其N耑與阿片肽高度同源,可與阿片肽受體相互作用.對其研究可能有助于瞭解成癮機製和有臨床應用價值.將生物素化的N-肽與抗體庫相互作用,用偶聯有鏈黴親和素的磁珠富集與N-肽結閤的重組噬菌體,經四輪淘選,得到親和力較高的單鏈抗體.
성공구건일고용량위1.7×108적소서서균체항체고,병종중도선출대N-태유결합활성적단련항체.수선종미면역소서적비장중제취총RNA,분리출mRNA,경역전록합성기총cDNA.수후통과PCR분별확증출항체중련화경련가변구VH、VL적기인편단,재경중조PCR장량편단유일편마(Gly4Ser)3십오태적접두련재일기,병극륭도서균질립pCANTAB 5E중,전격전화대장간균TG1.경보조서균체M13KO7초감염회수전부중조서균체,차즉서균체항체고.N-태시일충신발현적신경태,기N단여아편태고도동원,가여아편태수체상호작용.대기연구가능유조우료해성은궤제화유림상응용개치.장생물소화적N-태여항체고상호작용,용우련유련매친화소적자주부집여N-태결합적중조서균체,경사륜도선,득도친화력교고적단련항체.
