菌物系统
菌物繫統
균물계통
MYCOSYSTEMA
2003年
1期
101-106
,共6页
周凯松%常宁%彭俊峰%张晗星%张长铠
週凱鬆%常寧%彭俊峰%張晗星%張長鎧
주개송%상저%팽준봉%장함성%장장개
滴度%重组率%免疫筛选
滴度%重組率%免疫篩選
적도%중조솔%면역사선
采用QuickPrep micro mRNA Purification 试剂盒从新鲜金针菇子实体中快速提取、纯化mRNA,Time Saver cDNA Synthesis试剂盒逆转录成cDNA分子后,通过在cDNA分子两端加上EcoRⅠ/NotⅠ接头,在T4多核苷酸激酶的作用下磷酸化,与表达载体λZAP Express Predigested Vector连接,然后用包装蛋白在体外包装连接产物,感染E.coli XL1-Blue MRF'构建成表达cDNA文库.经检测:文库滴度为4.0×106 pfu/ml,文库扩增后,滴度达2.0×1010 pfu/ml,重组率为90%,cDNA分子长度在0.3-3.5 Kb范围.应用原位免疫杂交,初步筛选出火菇素相关基因的阳性克隆.
採用QuickPrep micro mRNA Purification 試劑盒從新鮮金針菇子實體中快速提取、純化mRNA,Time Saver cDNA Synthesis試劑盒逆轉錄成cDNA分子後,通過在cDNA分子兩耑加上EcoRⅠ/NotⅠ接頭,在T4多覈苷痠激酶的作用下燐痠化,與錶達載體λZAP Express Predigested Vector連接,然後用包裝蛋白在體外包裝連接產物,感染E.coli XL1-Blue MRF'構建成錶達cDNA文庫.經檢測:文庫滴度為4.0×106 pfu/ml,文庫擴增後,滴度達2.0×1010 pfu/ml,重組率為90%,cDNA分子長度在0.3-3.5 Kb範圍.應用原位免疫雜交,初步篩選齣火菇素相關基因的暘性剋隆.
채용QuickPrep micro mRNA Purification 시제합종신선금침고자실체중쾌속제취、순화mRNA,Time Saver cDNA Synthesis시제합역전록성cDNA분자후,통과재cDNA분자량단가상EcoRⅠ/NotⅠ접두,재T4다핵감산격매적작용하린산화,여표체재체λZAP Express Predigested Vector련접,연후용포장단백재체외포장련접산물,감염E.coli XL1-Blue MRF'구건성표체cDNA문고.경검측:문고적도위4.0×106 pfu/ml,문고확증후,적도체2.0×1010 pfu/ml,중조솔위90%,cDNA분자장도재0.3-3.5 Kb범위.응용원위면역잡교,초보사선출화고소상관기인적양성극륭.
