CAJ | 학술논문

背景与目的:MC5是一种特异性良好的针对人结肠癌的鼠源性单克隆抗体,而将鼠源性抗体小型化可使其用于在体研究时引起人抗鼠抗体反应的可能性大大降低.本研究的目的是制备MC5的噬菌体呈现型单链可变区片段(ScFv).方法:从分泌MC5的杂交瘤细胞分离mRNA,RTPCR分别扩增抗体的重、轻链可变区DNA(VH和VLDNA),两者经linkerDNA连接形成ScFvDNA.将ScFvDNA与噬粒载体pCANTAB5E的连接产物转化于大肠杆菌TG1,经M13KO7辅助噬菌体感染后,获得重组噬菌体抗体ScFv.以高表达MC5结合抗原的细胞株SW480对重组噬菌体抗体ScFv进行两轮筛选后,随机挑取克隆经ELISA筛选呈现MC5ScFv的噬菌体单克隆,经竞争ELISA对阳性克隆结合抗原的能力进行鉴定.结果:VH、VL和ScFvDNA分别约为340bp、320bp和750bp.在随机筛检的25个克隆中得到10个呈现MC5ScFv的噬菌体单克隆,其中结合抗原能力强的克隆有3个.结论:用噬菌体呈现技术成功地制备了单抗MC5的ScFv,为拓展该抗体的应用范围奠定了基础.
배경여목적:MC5시일충특이성량호적침대인결장암적서원성단극륭항체,이장서원성항체소형화가사기용우재체연구시인기인항서항체반응적가능성대대강저.본연구적목적시제비MC5적서균체정현형단련가변구편단(ScFv).방법:종분비MC5적잡교류세포분리mRNA,RTPCR분별확증항체적중、경련가변구DNA(VH화VLDNA),량자경linkerDNA련접형성ScFvDNA.장ScFvDNA여서립재체pCANTAB5E적련접산물전화우대장간균TG1,경M13KO7보조서균체감염후,획득중조서균체항체ScFv.이고표체MC5결합항원적세포주SW480대중조서균체항체ScFv진행량륜사선후,수궤도취극륭경ELISA사선정현MC5ScFv적서균체단극륭,경경쟁ELISA대양성극륭결합항원적능력진행감정.결과:VH、VL화ScFvDNA분별약위340bp、320bp화750bp.재수궤사검적25개극륭중득도10개정현MC5ScFv적서균체단극륭,기중결합항원능력강적극륭유3개.결론:용서균체정현기술성공지제비료단항MC5적ScFv,위탁전해항체적응용범위전정료기출.