中国肿瘤生物治疗杂志
中國腫瘤生物治療雜誌
중국종류생물치료잡지
CHINESE JOURNAL OF CANCER BIOTHERAPY
2002年
1期
27-31
,共5页
付员根%刘志国%温博贵%王晓侠%吴开春%樊代明
付員根%劉誌國%溫博貴%王曉俠%吳開春%樊代明
부원근%류지국%온박귀%왕효협%오개춘%번대명
腺病毒%纤维蛋白%表达载体%基因转染%真核细胞
腺病毒%纖維蛋白%錶達載體%基因轉染%真覈細胞
선병독%섬유단백%표체재체%기인전염%진핵세포
目的:构建腺病毒纤维蛋白基因的真核表达质粒,并检测其在真核细胞中的表达,为腺病毒靶向性载体构建创造条件.方法:采用限制性内切酶技术,酶切腺病毒骨架质粒pAdEasy-1,经多次亚克隆,最后完成克隆纤维蛋白基因并构建其真核表达质粒.用脂质体法将构建好的真核表达质粒瞬时转染COS-7细胞,于转染后72 h,用Western blot法检测所表达的蛋白.结果:克隆成功纤维蛋白基因,并构建纤维蛋白基因真核表达质粒pcDNA/Fiber,经限制性内切酶酶切鉴定及测序证实了其正确性.Western blot结果显示,新表达蛋白在变性条件下大小为62 kD,而在非变性条件下为186 kD.结论:纤维蛋白基因真核表达质粒能在真核细胞中表达,产物具有三聚体结构,可用于腺病毒靶向性载体的构建.
目的:構建腺病毒纖維蛋白基因的真覈錶達質粒,併檢測其在真覈細胞中的錶達,為腺病毒靶嚮性載體構建創造條件.方法:採用限製性內切酶技術,酶切腺病毒骨架質粒pAdEasy-1,經多次亞剋隆,最後完成剋隆纖維蛋白基因併構建其真覈錶達質粒.用脂質體法將構建好的真覈錶達質粒瞬時轉染COS-7細胞,于轉染後72 h,用Western blot法檢測所錶達的蛋白.結果:剋隆成功纖維蛋白基因,併構建纖維蛋白基因真覈錶達質粒pcDNA/Fiber,經限製性內切酶酶切鑒定及測序證實瞭其正確性.Western blot結果顯示,新錶達蛋白在變性條件下大小為62 kD,而在非變性條件下為186 kD.結論:纖維蛋白基因真覈錶達質粒能在真覈細胞中錶達,產物具有三聚體結構,可用于腺病毒靶嚮性載體的構建.
목적:구건선병독섬유단백기인적진핵표체질립,병검측기재진핵세포중적표체,위선병독파향성재체구건창조조건.방법:채용한제성내절매기술,매절선병독골가질립pAdEasy-1,경다차아극륭,최후완성극륭섬유단백기인병구건기진핵표체질립.용지질체법장구건호적진핵표체질립순시전염COS-7세포,우전염후72 h,용Western blot법검측소표체적단백.결과:극륭성공섬유단백기인,병구건섬유단백기인진핵표체질립pcDNA/Fiber,경한제성내절매매절감정급측서증실료기정학성.Western blot결과현시,신표체단백재변성조건하대소위62 kD,이재비변성조건하위186 kD.결론:섬유단백기인진핵표체질립능재진핵세포중표체,산물구유삼취체결구,가용우선병독파향성재체적구건.
