生物工程学报
生物工程學報
생물공정학보
CHINESE JOURNAL OF BIOTECHNOLOGY
2001年
6期
673-677
,共5页
李祥%张伟%茅翔%蔡煊%杨蕴刘%赵国屏%姜卫红
李祥%張偉%茅翔%蔡煊%楊蘊劉%趙國屏%薑衛紅
리상%장위%모상%채훤%양온류%조국병%강위홍
GL-7ACA酰化酶%表达%检测
GL-7ACA酰化酶%錶達%檢測
GL-7ACA선화매%표체%검측
戊二酰-7-氨基头孢烷酸(GL-7ACA)酰化酶能够催化GL-7ACA分解生成7-ACA,后者是工业半合成生产头孢类抗菌素所需的重要前体.为了准确地检测GL-7ACA酰化酶及其突变体的表达,本研究通过构建一系列质粒载体,建立了两个简便有效地测定GL-7ACA酰化酶基因acy表达量的系统,从而可对酶的比活力进行定量.我们将两个报告基因,即儿茶酚双加氧酶基因(xylE)和β-半乳糖苷酶基因(lacZ)分别置于acy基因的下游,使之与acy基因共用一个启动子,进行串联表达,各自构成一个多顺反子系统.实验证明,基因融合后的儿茶酚双加氧酶或β-半乳糖苷酶的活力可以间接反映acy的表达量.
戊二酰-7-氨基頭孢烷痠(GL-7ACA)酰化酶能夠催化GL-7ACA分解生成7-ACA,後者是工業半閤成生產頭孢類抗菌素所需的重要前體.為瞭準確地檢測GL-7ACA酰化酶及其突變體的錶達,本研究通過構建一繫列質粒載體,建立瞭兩箇簡便有效地測定GL-7ACA酰化酶基因acy錶達量的繫統,從而可對酶的比活力進行定量.我們將兩箇報告基因,即兒茶酚雙加氧酶基因(xylE)和β-半乳糖苷酶基因(lacZ)分彆置于acy基因的下遊,使之與acy基因共用一箇啟動子,進行串聯錶達,各自構成一箇多順反子繫統.實驗證明,基因融閤後的兒茶酚雙加氧酶或β-半乳糖苷酶的活力可以間接反映acy的錶達量.
무이선-7-안기두포완산(GL-7ACA)선화매능구최화GL-7ACA분해생성7-ACA,후자시공업반합성생산두포류항균소소수적중요전체.위료준학지검측GL-7ACA선화매급기돌변체적표체,본연구통과구건일계렬질립재체,건립료량개간편유효지측정GL-7ACA선화매기인acy표체량적계통,종이가대매적비활력진행정량.아문장량개보고기인,즉인다분쌍가양매기인(xylE)화β-반유당감매기인(lacZ)분별치우acy기인적하유,사지여acy기인공용일개계동자,진행천련표체,각자구성일개다순반자계통.실험증명,기인융합후적인다분쌍가양매혹β-반유당감매적활력가이간접반영acy적표체량.
