生物化学与生物物理进展
生物化學與生物物理進展
생물화학여생물물리진전
PROGRESS IN BIOCHEMISTRY AND BIOPHYSICS
2004年
1期
36-40
,共5页
郑旭煦%欧阳克清%高虹%许治良%胡应和%蔡绍皙
鄭旭煦%歐暘剋清%高虹%許治良%鬍應和%蔡紹皙
정욱후%구양극청%고홍%허치량%호응화%채소석
黑色素皮质素受体(MC4R),报告基因,激动剂,高通量筛选
黑色素皮質素受體(MC4R),報告基因,激動劑,高通量篩選
흑색소피질소수체(MC4R),보고기인,격동제,고통량사선
为了建立黑色素皮质素受体(MC4R)激动剂的高通量筛选方法,将人的MC4R基因质粒(hMC4R/pCDNA3.1)与报告基因质粒(3×CRE/3×MRE/SRE-LUC)按1∶ 5的比例共转染到HEK293细胞,通过G418筛选,建立了稳定的MC4R激动剂筛选细胞株.利用MC4R内源激动剂α-MSH探索和优化了每孔接种细胞数目、激动剂孵育时间、溶剂DMSO终浓度、荧光素酶底物浓度等筛选条件,建立了可靠的筛选方法.实验表明:当细胞数目为4×104个/孔,激动剂孵育时间为8 h,每孔DMSO终浓度小于1%和α-MSH终浓度为1 μmol/L时,系统Z'-因子接近0.7,能够用于MC4R激动剂的高通量筛选.
為瞭建立黑色素皮質素受體(MC4R)激動劑的高通量篩選方法,將人的MC4R基因質粒(hMC4R/pCDNA3.1)與報告基因質粒(3×CRE/3×MRE/SRE-LUC)按1∶ 5的比例共轉染到HEK293細胞,通過G418篩選,建立瞭穩定的MC4R激動劑篩選細胞株.利用MC4R內源激動劑α-MSH探索和優化瞭每孔接種細胞數目、激動劑孵育時間、溶劑DMSO終濃度、熒光素酶底物濃度等篩選條件,建立瞭可靠的篩選方法.實驗錶明:噹細胞數目為4×104箇/孔,激動劑孵育時間為8 h,每孔DMSO終濃度小于1%和α-MSH終濃度為1 μmol/L時,繫統Z'-因子接近0.7,能夠用于MC4R激動劑的高通量篩選.
위료건립흑색소피질소수체(MC4R)격동제적고통량사선방법,장인적MC4R기인질립(hMC4R/pCDNA3.1)여보고기인질립(3×CRE/3×MRE/SRE-LUC)안1∶ 5적비례공전염도HEK293세포,통과G418사선,건립료은정적MC4R격동제사선세포주.이용MC4R내원격동제α-MSH탐색화우화료매공접충세포수목、격동제부육시간、용제DMSO종농도、형광소매저물농도등사선조건,건립료가고적사선방법.실험표명:당세포수목위4×104개/공,격동제부육시간위8 h,매공DMSO종농도소우1%화α-MSH종농도위1 μmol/L시,계통Z'-인자접근0.7,능구용우MC4R격동제적고통량사선.
