军事医学科学院院刊
軍事醫學科學院院刊
군사의학과학원원간
BULLETIN OF THE ACADEMY OF MILITARY MEDICAL SCIENCES
2007年
1期
24-27,38
,共5页
王峰%杨静%王国栋%丁晓然%张敏丽%王升启
王峰%楊靜%王國棟%丁曉然%張敏麗%王升啟
왕봉%양정%왕국동%정효연%장민려%왕승계
纤连蛋白%乙肝表面抗原%基因表达%纯化%蛋白芯片%聚合酶链反应
纖連蛋白%乙肝錶麵抗原%基因錶達%純化%蛋白芯片%聚閤酶鏈反應
섬련단백%을간표면항원%기인표체%순화%단백심편%취합매련반응
目的:克隆纤连蛋白(fibronectin)各功能区域基因,在大肠杆菌中表达以筛选与HBsAg相互作用的区域.方法:将纤连蛋白分成7个片段,设计引物,利用RT-PCR从HepG2.2.15中扩增出相应的PCR产物,连接到表达载体pGEX4T-1中,用IPTG诱导目的蛋白在E.coli中表达,通过Western印迹分析对表达产物进行鉴定.融合蛋白纯化后制备蛋白芯片,与HBsAg杂交,筛选纤连蛋白中与HBsAg相互作用的区域.结果:经RT-PCR从HepG2.2.15中扩增到各结构域片段的cDNA,序列分析均正确;SDS-PAGE分析表明,各结构域片段的可溶性表达产物均占细菌可溶性蛋白的10%以上;Western印迹分析提示,诱导表达产物可与GST单抗发生特异性反应.经制备蛋白芯片并杂交,发现片段FN1、FN2信号最强.结论:成功地表达了纤连蛋白各片段,蛋白芯片杂交结果显示纤连蛋白可能是通过Ⅱ型肝素结合区及其羰基端(c端)与HBsAg相互作用.
目的:剋隆纖連蛋白(fibronectin)各功能區域基因,在大腸桿菌中錶達以篩選與HBsAg相互作用的區域.方法:將纖連蛋白分成7箇片段,設計引物,利用RT-PCR從HepG2.2.15中擴增齣相應的PCR產物,連接到錶達載體pGEX4T-1中,用IPTG誘導目的蛋白在E.coli中錶達,通過Western印跡分析對錶達產物進行鑒定.融閤蛋白純化後製備蛋白芯片,與HBsAg雜交,篩選纖連蛋白中與HBsAg相互作用的區域.結果:經RT-PCR從HepG2.2.15中擴增到各結構域片段的cDNA,序列分析均正確;SDS-PAGE分析錶明,各結構域片段的可溶性錶達產物均佔細菌可溶性蛋白的10%以上;Western印跡分析提示,誘導錶達產物可與GST單抗髮生特異性反應.經製備蛋白芯片併雜交,髮現片段FN1、FN2信號最彊.結論:成功地錶達瞭纖連蛋白各片段,蛋白芯片雜交結果顯示纖連蛋白可能是通過Ⅱ型肝素結閤區及其羰基耑(c耑)與HBsAg相互作用.
목적:극륭섬련단백(fibronectin)각공능구역기인,재대장간균중표체이사선여HBsAg상호작용적구역.방법:장섬련단백분성7개편단,설계인물,이용RT-PCR종HepG2.2.15중확증출상응적PCR산물,련접도표체재체pGEX4T-1중,용IPTG유도목적단백재E.coli중표체,통과Western인적분석대표체산물진행감정.융합단백순화후제비단백심편,여HBsAg잡교,사선섬련단백중여HBsAg상호작용적구역.결과:경RT-PCR종HepG2.2.15중확증도각결구역편단적cDNA,서렬분석균정학;SDS-PAGE분석표명,각결구역편단적가용성표체산물균점세균가용성단백적10%이상;Western인적분석제시,유도표체산물가여GST단항발생특이성반응.경제비단백심편병잡교,발현편단FN1、FN2신호최강.결론:성공지표체료섬련단백각편단,단백심편잡교결과현시섬련단백가능시통과Ⅱ형간소결합구급기탄기단(c단)여HBsAg상호작용.
