生物技术
生物技術
생물기술
BIOTECHNOLOGY
2007年
1期
11-14
,共4页
吴亚敏%邓莉%彭礼飞%杨陈%胡晶晶%付汉维
吳亞敏%鄧莉%彭禮飛%楊陳%鬍晶晶%付漢維
오아민%산리%팽례비%양진%호정정%부한유
线虫抗凝血肽5(rNAP 5)%融合蛋白%大肠杆菌%表达
線蟲抗凝血肽5(rNAP 5)%融閤蛋白%大腸桿菌%錶達
선충항응혈태5(rNAP 5)%융합단백%대장간균%표체
目的:用大肠杆菌表达获得重组线虫抗凝血肽5(rNAP 5),为研究开发NAP5的功能与应用提供原料来源.方法:将扩增的NAP5基因经BamH Ⅰ和HindⅢ双酶切后与表达载体pET-32a连接.构建好的重组表达质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)后,分别经IPTG和乳糖诱导表达,并探讨诱导表达条件,分析表达产物的可溶性情况.表达产物经镍亲和纯化后,用凝血酶原时间(PT)和活化部分凝血活酶时间(aPTT)检测体外抗凝活性.结果:成功构建了pET-32a/NAP5表达载体,IPTG和乳糖均能诱导目的蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)中高效地可溶性表达.优化条件下每升LB培养基可获可溶性目的融合蛋白量达65.3mg.纯化的蛋白能明显延长PT及aPTT,7.0mg/L的蛋白平均约延长5.09倍aPTT,2.55倍PT.结论:在大肠杆菌中成功表达了具有很好生物活性的Trx-NAP5融合蛋白,为研究开发NAP5的功能与应用奠定了基础.
目的:用大腸桿菌錶達穫得重組線蟲抗凝血肽5(rNAP 5),為研究開髮NAP5的功能與應用提供原料來源.方法:將擴增的NAP5基因經BamH Ⅰ和HindⅢ雙酶切後與錶達載體pET-32a連接.構建好的重組錶達質粒轉化至大腸桿菌BL21(DE3)後,分彆經IPTG和乳糖誘導錶達,併探討誘導錶達條件,分析錶達產物的可溶性情況.錶達產物經鎳親和純化後,用凝血酶原時間(PT)和活化部分凝血活酶時間(aPTT)檢測體外抗凝活性.結果:成功構建瞭pET-32a/NAP5錶達載體,IPTG和乳糖均能誘導目的蛋白在大腸桿菌BL21(DE3)中高效地可溶性錶達.優化條件下每升LB培養基可穫可溶性目的融閤蛋白量達65.3mg.純化的蛋白能明顯延長PT及aPTT,7.0mg/L的蛋白平均約延長5.09倍aPTT,2.55倍PT.結論:在大腸桿菌中成功錶達瞭具有很好生物活性的Trx-NAP5融閤蛋白,為研究開髮NAP5的功能與應用奠定瞭基礎.
목적:용대장간균표체획득중조선충항응혈태5(rNAP 5),위연구개발NAP5적공능여응용제공원료래원.방법:장확증적NAP5기인경BamH Ⅰ화HindⅢ쌍매절후여표체재체pET-32a련접.구건호적중조표체질립전화지대장간균BL21(DE3)후,분별경IPTG화유당유도표체,병탐토유도표체조건,분석표체산물적가용성정황.표체산물경얼친화순화후,용응혈매원시간(PT)화활화부분응혈활매시간(aPTT)검측체외항응활성.결과:성공구건료pET-32a/NAP5표체재체,IPTG화유당균능유도목적단백재대장간균BL21(DE3)중고효지가용성표체.우화조건하매승LB배양기가획가용성목적융합단백량체65.3mg.순화적단백능명현연장PT급aPTT,7.0mg/L적단백평균약연장5.09배aPTT,2.55배PT.결론:재대장간균중성공표체료구유흔호생물활성적Trx-NAP5융합단백,위연구개발NAP5적공능여응용전정료기출.
