CAJ | 학술논문

目的:构建钙调磷酸酶(CaN)融合基因的原核表达载体,并使其获得表达,为研究该蛋白的功能,在病理生理过程中的变化及相关疾病的治疗奠定基础.方法:利用OLIGO 6.0生物学软件设计一对特异性引物,并在引物中引入适当的酶切位点,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR),扩增出CaN基因,经BamHI和XhoⅠ双酶切后,将其克隆于上游融合了GST标签的pGEX-6P-1表达载体中,选取鉴定为阳性的重组表达载体,转化于受体菌BL21中,并利用1mM IPTG对其进行诱导,收获表达产物进行SDS-PAGE电泳分析和Western印迹(blot)鉴定,以确定融合表达的CaN基因的反应活性.结果:RT-PCR后扩增得到了大小约为700bp的目的片段,克隆于表达载体pGEX-6P-1,经测序分析后,证实所获得的与Genebank提供的序列相一致,CaN基因融合表达产物经SDS-PAGA电泳分析发现该重组蛋白大小约为45kD,利用CaN Aβ抗体进行Western blot分析,结果证实该表达的融合蛋白具有较好的免疫反应性.结论:钙调磷酸酶Aβ以融合蛋白的形式获得了表达,而且融合表达的蛋白具有反应活性.
목적:구건개조린산매(CaN)융합기인적원핵표체재체,병사기획득표체,위연구해단백적공능,재병리생리과정중적변화급상관질병적치료전정기출.방법:이용OLIGO 6.0생물학연건설계일대특이성인물,병재인물중인입괄당적매절위점,채용역전록취합매련반응(RT-PCR),확증출CaN기인,경BamHI화XhoⅠ쌍매절후,장기극륭우상유융합료GST표첨적pGEX-6P-1표체재체중,선취감정위양성적중조표체재체,전화우수체균BL21중,병이용1mM IPTG대기진행유도,수획표체산물진행SDS-PAGE전영분석화Western인적(blot)감정,이학정융합표체적CaN기인적반응활성.결과:RT-PCR후확증득도료대소약위700bp적목적편단,극륭우표체재체pGEX-6P-1,경측서분석후,증실소획득적여Genebank제공적서렬상일치,CaN기인융합표체산물경SDS-PAGA전영분석발현해중조단백대소약위45kD,이용CaN Aβ항체진행Western blot분석,결과증실해표체적융합단백구유교호적면역반응성.결론:개조린산매Aβ이융합단백적형식획득료표체,이차융합표체적단백구유반응활성.