中国中西医结合肾病杂志
中國中西醫結閤腎病雜誌
중국중서의결합신병잡지
CHINESE JOURNAL OF INTEGRATED TRADITIONAL AND WESTERN NEPHROLOGY
2008年
1期
7-9
,共3页
分泌蛋白%急性肾衰竭%融合蛋白
分泌蛋白%急性腎衰竭%融閤蛋白
분비단백%급성신쇠갈%융합단백
目的:体外表达并纯化Cyr61蛋白片段.方法:提取乳腺癌组织总RNA,用一步法RT-PCR选择扩增编码Cyr61蛋白的cDNA片段,并将之克隆到融合蛋白表达载体pQESOL中,转染大肠杆菌Rosetta-gamiTM2.异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达融合蛋白,用亲和层析法纯化.纯化产物经聚丙烯酰胺凝胶电泳及蛋白质印迹分析鉴定.结果:克隆到编码Cyr61蛋白片段的cDNA片段,其大小为930 bp.构建的表达质粒pQE80-Cyr61经限制性内切酶酶切和DNA测序证实为所需要的质粒.表达出相对分子质量分别为32 kD的可溶性融合蛋白,经蛋白质印迹分析鉴定为Cyr61的融合蛋白.结论:本实验克隆了编码Cyr61蛋白片段的eDNA序列,并成功地获得了可溶性表达的融合目的蛋白,为进一步制备抗Cyr61蛋白的抗体和建立Cyr61蛋白定量检测方法创造了条件.
目的:體外錶達併純化Cyr61蛋白片段.方法:提取乳腺癌組織總RNA,用一步法RT-PCR選擇擴增編碼Cyr61蛋白的cDNA片段,併將之剋隆到融閤蛋白錶達載體pQESOL中,轉染大腸桿菌Rosetta-gamiTM2.異丙基硫代半乳糖苷(IPTG)誘導錶達融閤蛋白,用親和層析法純化.純化產物經聚丙烯酰胺凝膠電泳及蛋白質印跡分析鑒定.結果:剋隆到編碼Cyr61蛋白片段的cDNA片段,其大小為930 bp.構建的錶達質粒pQE80-Cyr61經限製性內切酶酶切和DNA測序證實為所需要的質粒.錶達齣相對分子質量分彆為32 kD的可溶性融閤蛋白,經蛋白質印跡分析鑒定為Cyr61的融閤蛋白.結論:本實驗剋隆瞭編碼Cyr61蛋白片段的eDNA序列,併成功地穫得瞭可溶性錶達的融閤目的蛋白,為進一步製備抗Cyr61蛋白的抗體和建立Cyr61蛋白定量檢測方法創造瞭條件.
목적:체외표체병순화Cyr61단백편단.방법:제취유선암조직총RNA,용일보법RT-PCR선택확증편마Cyr61단백적cDNA편단,병장지극륭도융합단백표체재체pQESOL중,전염대장간균Rosetta-gamiTM2.이병기류대반유당감(IPTG)유도표체융합단백,용친화층석법순화.순화산물경취병희선알응효전영급단백질인적분석감정.결과:극륭도편마Cyr61단백편단적cDNA편단,기대소위930 bp.구건적표체질립pQE80-Cyr61경한제성내절매매절화DNA측서증실위소수요적질립.표체출상대분자질량분별위32 kD적가용성융합단백,경단백질인적분석감정위Cyr61적융합단백.결론:본실험극륭료편마Cyr61단백편단적eDNA서렬,병성공지획득료가용성표체적융합목적단백,위진일보제비항Cyr61단백적항체화건립Cyr61단백정량검측방법창조료조건.
