CAJ | 학술논문

目的:构建pcDNA3.1(-)/HSPC238真核表达载体,研究过表达HSPC238基因对人肝癌细胞株Bel7402细胞周期的影响.方法:采用PCR法从pET28b/HSPC238重组质粒中克隆得到HSPC238 cDNA全长序列,并将该片段亚克隆到真核表达载体pcDNA3.1(-)中,构建pcDNA3.1(-)/HSPC238真核表达质粒.经酶切和测序鉴定后,采用脂质体法将该重组质粒转染Bel7402细胞,随后经G418筛选4周,得到阳性克隆细胞株.用RT-PCR和Western blot技术分别检测HSPC238基因在Bel7402中的mRNA和蛋白水平的表达.随后用饥饿法使各组细胞周期同步化,再用流式细胞仪分析HSPC238过表达对细胞周期的影响.结果:pcDNA3.1(-)/HSPC238经酶切鉴定及DNA测序证实,目的基因HSPC238的序列完全正确;RT-PCR和Western blot检测显示,与转染pcDNA3.1(-)组和未转染组相比较,转染pcDNA3.1(-)/HSPC238组的mRNA和蛋白表达水平均明显增高,但前两者间没有差异.用饥饿法同步化后,流式细胞仪检测显示过表达HSPC238可延缓Bel7402细胞株从G1期进入S期.结论:成功构建了pcDNA3.1(-)/HSPC238真核表达载体,并在Bel7402中表达.初步发现过表达HSPC238可延缓肝癌细胞的细胞周期,为更进一步研究HSPC238蛋白的功能奠定了基础.
목적:구건pcDNA3.1(-)/HSPC238진핵표체재체,연구과표체HSPC238기인대인간암세포주Bel7402세포주기적영향.방법:채용PCR법종pET28b/HSPC238중조질립중극륭득도HSPC238 cDNA전장서렬,병장해편단아극륭도진핵표체재체pcDNA3.1(-)중,구건pcDNA3.1(-)/HSPC238진핵표체질립.경매절화측서감정후,채용지질체법장해중조질립전염Bel7402세포,수후경G418사선4주,득도양성극륭세포주.용RT-PCR화Western blot기술분별검측HSPC238기인재Bel7402중적mRNA화단백수평적표체.수후용기아법사각조세포주기동보화,재용류식세포의분석HSPC238과표체대세포주기적영향.결과:pcDNA3.1(-)/HSPC238경매절감정급DNA측서증실,목적기인HSPC238적서렬완전정학;RT-PCR화Western blot검측현시,여전염pcDNA3.1(-)조화미전염조상비교,전염pcDNA3.1(-)/HSPC238조적mRNA화단백표체수평균명현증고,단전량자간몰유차이.용기아법동보화후,류식세포의검측현시과표체HSPC238가연완Bel7402세포주종G1기진입S기.결론:성공구건료pcDNA3.1(-)/HSPC238진핵표체재체,병재Bel7402중표체.초보발현과표체HSPC238가연완간암세포적세포주기,위경진일보연구HSPC238단백적공능전정료기출.