中国生化药物杂志
中國生化藥物雜誌
중국생화약물잡지
CHINESE JOURNAL OF BIOCHEMICAL PHARMACEUTICS
2011年
4期
261-264
,共4页
林晓思%许健%王生育%颜江华
林曉思%許健%王生育%顏江華
림효사%허건%왕생육%안강화
CD5%单链抗体%基因%表达
CD5%單鏈抗體%基因%錶達
CD5%단련항체%기인%표체
目的:构建高表达的抗CD5单链抗体(scFv anti-CD5)工程菌,为开展以抗CD5单链抗体为构件的肿瘤免疫治疗研究奠定基础.方法:从Genbank中获得抗CD5单克隆抗体H65的重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)的基因序列,用连接肽的编码序列连接,用重叠PCR技术获得目的基因,酶切后插入pET22b(+)构成重组质粒.测序正确的重组质粒转入E.coli BL21(DE3)诱导表达,产物经Ni-NTA柱纯化后复性,流式细胞术和Western blotting检测活性.结果:获得序列正确的重组质粒,工程菌表达量高,产物复性后具有识别CD5抗原的活性.结论:成功构建了高表达scFv anti-CD5的工程菌,为scFv anti-CD5的应用奠定了基础.
目的:構建高錶達的抗CD5單鏈抗體(scFv anti-CD5)工程菌,為開展以抗CD5單鏈抗體為構件的腫瘤免疫治療研究奠定基礎.方法:從Genbank中穫得抗CD5單剋隆抗體H65的重鏈可變區(VH)和輕鏈可變區(VL)的基因序列,用連接肽的編碼序列連接,用重疊PCR技術穫得目的基因,酶切後插入pET22b(+)構成重組質粒.測序正確的重組質粒轉入E.coli BL21(DE3)誘導錶達,產物經Ni-NTA柱純化後複性,流式細胞術和Western blotting檢測活性.結果:穫得序列正確的重組質粒,工程菌錶達量高,產物複性後具有識彆CD5抗原的活性.結論:成功構建瞭高錶達scFv anti-CD5的工程菌,為scFv anti-CD5的應用奠定瞭基礎.
목적:구건고표체적항CD5단련항체(scFv anti-CD5)공정균,위개전이항CD5단련항체위구건적종류면역치료연구전정기출.방법:종Genbank중획득항CD5단극륭항체H65적중련가변구(VH)화경련가변구(VL)적기인서렬,용련접태적편마서렬련접,용중첩PCR기술획득목적기인,매절후삽입pET22b(+)구성중조질립.측서정학적중조질립전입E.coli BL21(DE3)유도표체,산물경Ni-NTA주순화후복성,류식세포술화Western blotting검측활성.결과:획득서렬정학적중조질립,공정균표체량고,산물복성후구유식별CD5항원적활성.결론:성공구건료고표체scFv anti-CD5적공정균,위scFv anti-CD5적응용전정료기출.
