南方医科大学学报
南方醫科大學學報
남방의과대학학보
JOURNAL OF SOUTHERN MEDICAL UNIVERSITY
2012年
4期
456-461
,共6页
陈敏芳%麦荣嘉%莫倩珍%周晓红
陳敏芳%麥榮嘉%莫倩珍%週曉紅
진민방%맥영가%막천진%주효홍
日本血吸虫%小热休克蛋白%RNA干扰%dsRNA
日本血吸蟲%小熱休剋蛋白%RNA榦擾%dsRNA
일본혈흡충%소열휴극단백%RNA간우%dsRNA
目的 研究日本血吸虫小热休克蛋白(sHSP)Sjp40基因的RNA干扰效应及其干扰后日本血吸虫HSP60、HSP70、HSP90基因在mRNA水平出现的协同效应,观察各期虫体Sjp40、SjHSP60、SjHSP70、SjHSP90基因mRNA表达水平.方法 以双链RNA(dsRNA)实现RNA干扰.体外转录合成dsRNA,将Sjp40的dsRNA(dsSjp40)及阴性对照GFP的dsRNA(dsGFP)通过浸泡法转染到日本血吸虫成虫中,体外培养7d后用TRIZOL法提取其总RNA及总蛋白,实时荧光定量PCR(qPCR)检测Sjp40基因及SjHSP60、SjHSP70、SjHSP90基因mRNA的表达,Western blot检测Sjp40蛋白表达产物.提取各期虫体总RNA,qPCR检测Sjp40、SjHSP60、SjHSP70、SjHSP90基因的mRNA表达.结果 转染后Sjp40 dsRNA转染组目的基因的转录水平较阴性对照GFP dsRNA转染组下降了80％左右；蛋白质水平较空白对照及阴性对照组(dsGFP)出现明显降低,qPCR结果显示在Sjp40基因RNA干扰后SjHSP60、SjHSP70、SjHSP90基因的mRNA表达水平未发现明显变化.此四种HSPs在日本血吸虫生活史不同时期mRNA表达存在明显差异,Sjp40基因在虫卵期mRAN水平表达相对其他HSPs基因高.结论 dsSjp40 RNAi可特异性抑制Sjp40的表达,但对SjHSP60、SjHSP70、SjHSP90基因mRNA的表达没有明显的影响.
目的 研究日本血吸蟲小熱休剋蛋白(sHSP)Sjp40基因的RNA榦擾效應及其榦擾後日本血吸蟲HSP60、HSP70、HSP90基因在mRNA水平齣現的協同效應,觀察各期蟲體Sjp40、SjHSP60、SjHSP70、SjHSP90基因mRNA錶達水平.方法 以雙鏈RNA(dsRNA)實現RNA榦擾.體外轉錄閤成dsRNA,將Sjp40的dsRNA(dsSjp40)及陰性對照GFP的dsRNA(dsGFP)通過浸泡法轉染到日本血吸蟲成蟲中,體外培養7d後用TRIZOL法提取其總RNA及總蛋白,實時熒光定量PCR(qPCR)檢測Sjp40基因及SjHSP60、SjHSP70、SjHSP90基因mRNA的錶達,Western blot檢測Sjp40蛋白錶達產物.提取各期蟲體總RNA,qPCR檢測Sjp40、SjHSP60、SjHSP70、SjHSP90基因的mRNA錶達.結果 轉染後Sjp40 dsRNA轉染組目的基因的轉錄水平較陰性對照GFP dsRNA轉染組下降瞭80％左右；蛋白質水平較空白對照及陰性對照組(dsGFP)齣現明顯降低,qPCR結果顯示在Sjp40基因RNA榦擾後SjHSP60、SjHSP70、SjHSP90基因的mRNA錶達水平未髮現明顯變化.此四種HSPs在日本血吸蟲生活史不同時期mRNA錶達存在明顯差異,Sjp40基因在蟲卵期mRAN水平錶達相對其他HSPs基因高.結論 dsSjp40 RNAi可特異性抑製Sjp40的錶達,但對SjHSP60、SjHSP70、SjHSP90基因mRNA的錶達沒有明顯的影響.
목적 연구일본혈흡충소열휴극단백(sHSP)Sjp40기인적RNA간우효응급기간우후일본혈흡충HSP60、HSP70、HSP90기인재mRNA수평출현적협동효응,관찰각기충체Sjp40、SjHSP60、SjHSP70、SjHSP90기인mRNA표체수평.방법 이쌍련RNA(dsRNA)실현RNA간우.체외전록합성dsRNA,장Sjp40적dsRNA(dsSjp40)급음성대조GFP적dsRNA(dsGFP)통과침포법전염도일본혈흡충성충중,체외배양7d후용TRIZOL법제취기총RNA급총단백,실시형광정량PCR(qPCR)검측Sjp40기인급SjHSP60、SjHSP70、SjHSP90기인mRNA적표체,Western blot검측Sjp40단백표체산물.제취각기충체총RNA,qPCR검측Sjp40、SjHSP60、SjHSP70、SjHSP90기인적mRNA표체.결과 전염후Sjp40 dsRNA전염조목적기인적전록수평교음성대조GFP dsRNA전염조하강료80％좌우；단백질수평교공백대조급음성대조조(dsGFP)출현명현강저,qPCR결과현시재Sjp40기인RNA간우후SjHSP60、SjHSP70、SjHSP90기인적mRNA표체수평미발현명현변화.차사충HSPs재일본혈흡충생활사불동시기mRNA표체존재명현차이,Sjp40기인재충란기mRAN수평표체상대기타HSPs기인고.결론 dsSjp40 RNAi가특이성억제Sjp40적표체,단대SjHSP60、SjHSP70、SjHSP90기인mRNA적표체몰유명현적영향.
