中国癌症防治杂志
中國癌癥防治雜誌
중국암증방치잡지
CHINESE JOURNAL OF ONCOLOGY PREVENTION AND TREATMENT
2012年
2期
174-178
,共5页
李永继%黄怡%阮细玲%廖柳凤%吴琼%黄文涛%徐恒
李永繼%黃怡%阮細玲%廖柳鳳%吳瓊%黃文濤%徐恆
리영계%황이%원세령%료류봉%오경%황문도%서항
乳腺癌%cyclin D1%MCF-7%细胞增殖、迁移
乳腺癌%cyclin D1%MCF-7%細胞增殖、遷移
유선암%cyclin D1%MCF-7%세포증식、천이
目的 构建含人 cyclin D1 基因全长编码区的蓝色真核荧光表达载体 BFP-cyclin D1,并观察 cyclin D1 的表达对MCF-7 增殖和迁移能力的影响.方法 以人乳腺癌 MCF-7 细胞总 RNA为模板,经 PCR扩增和酶切后与 pEBFP-N1 质粒连接,得到重组质粒BFP-cyclin D1.转染到人乳腺癌 MCF-7细胞后分为 3 组:实验组转染 BFP-cyclin D1,阴性对照组转染 pEBFP-N1;空白对照组为 MCF-7,以荧光定量 PCR 检测基因表达;MTT 实验检测细胞生长速度;细胞划痕实验检测细胞迁移能力.结果 成功构建了 BFP-cyclin D1,并在人乳腺癌 MCF-7 细胞中呈高表达,荧光定量 PCR 检测示实验组cyclin D1 在转染后 12h 开始增高,48h 达到高峰并持续高表达,与激光共聚焦显微镜观察实验组蓝色荧光表达量的趋势一致;MTT 实验证实实验组细胞增殖速度(48、72、96h)显著高于对照组(P<0.01);细胞迁移实验表明实验组细胞迁移能力显著高于对照组细胞(P<0.01).结论 cyclin D1的高表达促进了人乳腺癌 MCF-7细胞的增殖和迁移,这可能与其缩短细胞周期、促进DNA合成和复制功能有关.
目的 構建含人 cyclin D1 基因全長編碼區的藍色真覈熒光錶達載體 BFP-cyclin D1,併觀察 cyclin D1 的錶達對MCF-7 增殖和遷移能力的影響.方法 以人乳腺癌 MCF-7 細胞總 RNA為模闆,經 PCR擴增和酶切後與 pEBFP-N1 質粒連接,得到重組質粒BFP-cyclin D1.轉染到人乳腺癌 MCF-7細胞後分為 3 組:實驗組轉染 BFP-cyclin D1,陰性對照組轉染 pEBFP-N1;空白對照組為 MCF-7,以熒光定量 PCR 檢測基因錶達;MTT 實驗檢測細胞生長速度;細胞劃痕實驗檢測細胞遷移能力.結果 成功構建瞭 BFP-cyclin D1,併在人乳腺癌 MCF-7 細胞中呈高錶達,熒光定量 PCR 檢測示實驗組cyclin D1 在轉染後 12h 開始增高,48h 達到高峰併持續高錶達,與激光共聚焦顯微鏡觀察實驗組藍色熒光錶達量的趨勢一緻;MTT 實驗證實實驗組細胞增殖速度(48、72、96h)顯著高于對照組(P<0.01);細胞遷移實驗錶明實驗組細胞遷移能力顯著高于對照組細胞(P<0.01).結論 cyclin D1的高錶達促進瞭人乳腺癌 MCF-7細胞的增殖和遷移,這可能與其縮短細胞週期、促進DNA閤成和複製功能有關.
목적 구건함인 cyclin D1 기인전장편마구적람색진핵형광표체재체 BFP-cyclin D1,병관찰 cyclin D1 적표체대MCF-7 증식화천이능력적영향.방법 이인유선암 MCF-7 세포총 RNA위모판,경 PCR확증화매절후여 pEBFP-N1 질립련접,득도중조질립BFP-cyclin D1.전염도인유선암 MCF-7세포후분위 3 조:실험조전염 BFP-cyclin D1,음성대조조전염 pEBFP-N1;공백대조조위 MCF-7,이형광정량 PCR 검측기인표체;MTT 실험검측세포생장속도;세포화흔실험검측세포천이능력.결과 성공구건료 BFP-cyclin D1,병재인유선암 MCF-7 세포중정고표체,형광정량 PCR 검측시실험조cyclin D1 재전염후 12h 개시증고,48h 체도고봉병지속고표체,여격광공취초현미경관찰실험조람색형광표체량적추세일치;MTT 실험증실실험조세포증식속도(48、72、96h)현저고우대조조(P<0.01);세포천이실험표명실험조세포천이능력현저고우대조조세포(P<0.01).결론 cyclin D1적고표체촉진료인유선암 MCF-7세포적증식화천이,저가능여기축단세포주기、촉진DNA합성화복제공능유관.
