中国医学科学院学报
中國醫學科學院學報
중국의학과학원학보
ACTA ACADEMIAE MEDICINAE SINICAE
2012年
5期
474-479
,共6页
曹剑%王怡宁%石新琳%马国涛%孔令燕%薛华丹%雷晶%何泳蓝%金征宇
曹劍%王怡寧%石新琳%馬國濤%孔令燕%薛華丹%雷晶%何泳藍%金徵宇
조검%왕이저%석신림%마국도%공령연%설화단%뢰정%하영람%금정우
红色荧光蛋白%超小超顺磁性氧化铁%骨髓间充质干细胞%荧光成像%磁共振成像
紅色熒光蛋白%超小超順磁性氧化鐵%骨髓間充質榦細胞%熒光成像%磁共振成像
홍색형광단백%초소초순자성양화철%골수간충질간세포%형광성상%자공진성상
目的 利用超小超顺磁性氧化铁(USPIO)标记带有红色荧光蛋白(RFP)的F344大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs),探索双模态成像示踪标记干细胞示踪的可行性.方法 使用含USPIO(40 μg Fe/ml)的培养基与BMSCs/RFP共孵育培养24 h,标记后行普鲁士蓝染色、透射电镜检查及台盼蓝染色验证标记的有效性和安全性.实验组(n=8)通过心肌局部注射方式将双标干细胞移植至急性心肌梗死F344大鼠的梗死心肌周围,术后不同时间点(1d、1周、2周和4周)行磁共振成像和荧光成像,对双标干细胞进行示踪并比较信号强度变化;对照组(n=2)不注射细胞,行磁共振和光学成像.4周后将大鼠麻醉处死后取心脏病理行HE染色、普鲁士蓝染色和荧光成像,观察双标干细胞在心肌内的分布.结果 共孵育培养24 h的方式可以有效、安全地构建USPIO-RFP双标BMSCs干细胞,普鲁士蓝染色显示USPIO标记阳性率为99%,透射电镜提示USPIO颗粒主要位于胞质内溶酶体中.台盼蓝染色显示标记组和阴性对照组活细胞率差异无统计学意义(95.7%比96.3%,P>0.05).心肌局部注射双标干细胞的实验组8只大鼠,磁共振成像在术后4周内均能观察到注射区域信号强度降低,并且信号强度随时间的延长变化无统计学意义(P=0.66);在体荧光成像未能检测到荧光信号,而离体荧光成像检测到心脏表面细胞注射区域有较弱的荧光.病理切片染色显示梗死心肌周围细胞核密度增加,心肌中蓝染颗粒及荧光成像发光分布区域与HE染色中细胞核密度增加区域一致.结论 USPIO-RFP双标干细胞注射至大鼠急性梗死心肌后,在体磁共振成像在一定时间内能够实现对干细胞的示踪成像,离体荧光成像和病理荧光成像可以示踪移植干细胞.
目的 利用超小超順磁性氧化鐵(USPIO)標記帶有紅色熒光蛋白(RFP)的F344大鼠骨髓間充質榦細胞(BMSCs),探索雙模態成像示蹤標記榦細胞示蹤的可行性.方法 使用含USPIO(40 μg Fe/ml)的培養基與BMSCs/RFP共孵育培養24 h,標記後行普魯士藍染色、透射電鏡檢查及檯盼藍染色驗證標記的有效性和安全性.實驗組(n=8)通過心肌跼部註射方式將雙標榦細胞移植至急性心肌梗死F344大鼠的梗死心肌週圍,術後不同時間點(1d、1週、2週和4週)行磁共振成像和熒光成像,對雙標榦細胞進行示蹤併比較信號彊度變化;對照組(n=2)不註射細胞,行磁共振和光學成像.4週後將大鼠痳醉處死後取心髒病理行HE染色、普魯士藍染色和熒光成像,觀察雙標榦細胞在心肌內的分佈.結果 共孵育培養24 h的方式可以有效、安全地構建USPIO-RFP雙標BMSCs榦細胞,普魯士藍染色顯示USPIO標記暘性率為99%,透射電鏡提示USPIO顆粒主要位于胞質內溶酶體中.檯盼藍染色顯示標記組和陰性對照組活細胞率差異無統計學意義(95.7%比96.3%,P>0.05).心肌跼部註射雙標榦細胞的實驗組8隻大鼠,磁共振成像在術後4週內均能觀察到註射區域信號彊度降低,併且信號彊度隨時間的延長變化無統計學意義(P=0.66);在體熒光成像未能檢測到熒光信號,而離體熒光成像檢測到心髒錶麵細胞註射區域有較弱的熒光.病理切片染色顯示梗死心肌週圍細胞覈密度增加,心肌中藍染顆粒及熒光成像髮光分佈區域與HE染色中細胞覈密度增加區域一緻.結論 USPIO-RFP雙標榦細胞註射至大鼠急性梗死心肌後,在體磁共振成像在一定時間內能夠實現對榦細胞的示蹤成像,離體熒光成像和病理熒光成像可以示蹤移植榦細胞.
목적 이용초소초순자성양화철(USPIO)표기대유홍색형광단백(RFP)적F344대서골수간충질간세포(BMSCs),탐색쌍모태성상시종표기간세포시종적가행성.방법 사용함USPIO(40 μg Fe/ml)적배양기여BMSCs/RFP공부육배양24 h,표기후행보로사람염색、투사전경검사급태반람염색험증표기적유효성화안전성.실험조(n=8)통과심기국부주사방식장쌍표간세포이식지급성심기경사F344대서적경사심기주위,술후불동시간점(1d、1주、2주화4주)행자공진성상화형광성상,대쌍표간세포진행시종병비교신호강도변화;대조조(n=2)불주사세포,행자공진화광학성상.4주후장대서마취처사후취심장병리행HE염색、보로사람염색화형광성상,관찰쌍표간세포재심기내적분포.결과 공부육배양24 h적방식가이유효、안전지구건USPIO-RFP쌍표BMSCs간세포,보로사람염색현시USPIO표기양성솔위99%,투사전경제시USPIO과립주요위우포질내용매체중.태반람염색현시표기조화음성대조조활세포솔차이무통계학의의(95.7%비96.3%,P>0.05).심기국부주사쌍표간세포적실험조8지대서,자공진성상재술후4주내균능관찰도주사구역신호강도강저,병차신호강도수시간적연장변화무통계학의의(P=0.66);재체형광성상미능검측도형광신호,이리체형광성상검측도심장표면세포주사구역유교약적형광.병리절편염색현시경사심기주위세포핵밀도증가,심기중람염과립급형광성상발광분포구역여HE염색중세포핵밀도증가구역일치.결론 USPIO-RFP쌍표간세포주사지대서급성경사심기후,재체자공진성상재일정시간내능구실현대간세포적시종성상,리체형광성상화병리형광성상가이시종이식간세포.