实用儿科临床杂志
實用兒科臨床雜誌
실용인과림상잡지
Journal of Applied Clinical Pediatrics
2010年
22期
1708-1711
,共4页
任广立%方颖%马恒颢%张卫云%王鲜艳%许蔓春%彭智勇%赵树进
任廣立%方穎%馬恆顥%張衛雲%王鮮豔%許蔓春%彭智勇%趙樹進
임엄립%방영%마항호%장위운%왕선염%허만춘%팽지용%조수진
乙型肝炎病毒%基因治疗%小干扰RNA%毒副作用
乙型肝炎病毒%基因治療%小榦擾RNA%毒副作用
을형간염병독%기인치료%소간우RNA%독부작용
目的 探讨基于载体的表达性小干扰RNA(siRNA)对乙型肝炎病毒(HBV)转基因小鼠的毒副作用.方法 siRNA表达载体经微静脉注射转染HBV转基因小鼠,设立特异性siRNA组、PBS对照组、阴性质粒对照组及正常Balb/c小鼠对照组.在注射后5 d、12 d、19 d、26 d、33 d、2个月和3个月的不同时间,经其内眦静脉采血检测小鼠ALT水平变化.ELISA方法检测其血清干扰素-α(IFN-α)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平.Western blot检测其肝脏组织中B细胞淋巴瘤2(Bel-2)、原癌基因(c-Fos)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)的表达变化.采用TUNEL染色检测细胞凋亡,HE染色进行组织病理学观察.结果 基于聚合酶Ⅲ(PolⅢ)的siRNA表达载体与基于聚合酶Ⅱ(PolⅡ)的siRNA表达载体相比,长期作用机体可使转基因小鼠血清ALT水平显著升高(P<0.05);ELISA分析发现IFN-α水平前者似乎高于后苦,但差异无统计学意义(P>0.05).在治疗26 d,直到治疗3个月,特异性siRNA治疗组与PBS对照组相比,TNF-α表达在PolⅢ组表达明显降低(P<0.05);而PolⅡ组TNF-α表达与PBS对照组比较差异无统计学意义.Western blot结果表明肝组织Bcl-2、c-Fos表达显著增加,而Bax表达明显降低(P<0.05),且该组凋亡分析表明细胞凋亡被明显抑制.组织形态学可见肝细胞出现二倍体,核仁增大,核膜清晰可见.结论 基于PolⅢ的siRNA表达载体与PolⅡ的siRNA表达载体相比对肝细胞有一定的毒副作用,凋亡被抑制,细胞增殖失控.过强表达的HBV特异性siRNA可影响机体的生物网络调控,导致增殖与凋亡的失衡.
目的 探討基于載體的錶達性小榦擾RNA(siRNA)對乙型肝炎病毒(HBV)轉基因小鼠的毒副作用.方法 siRNA錶達載體經微靜脈註射轉染HBV轉基因小鼠,設立特異性siRNA組、PBS對照組、陰性質粒對照組及正常Balb/c小鼠對照組.在註射後5 d、12 d、19 d、26 d、33 d、2箇月和3箇月的不同時間,經其內眥靜脈採血檢測小鼠ALT水平變化.ELISA方法檢測其血清榦擾素-α(IFN-α)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)水平.Western blot檢測其肝髒組織中B細胞淋巴瘤2(Bel-2)、原癌基因(c-Fos)、Bcl-2相關X蛋白(Bax)的錶達變化.採用TUNEL染色檢測細胞凋亡,HE染色進行組織病理學觀察.結果 基于聚閤酶Ⅲ(PolⅢ)的siRNA錶達載體與基于聚閤酶Ⅱ(PolⅡ)的siRNA錶達載體相比,長期作用機體可使轉基因小鼠血清ALT水平顯著升高(P<0.05);ELISA分析髮現IFN-α水平前者似乎高于後苦,但差異無統計學意義(P>0.05).在治療26 d,直到治療3箇月,特異性siRNA治療組與PBS對照組相比,TNF-α錶達在PolⅢ組錶達明顯降低(P<0.05);而PolⅡ組TNF-α錶達與PBS對照組比較差異無統計學意義.Western blot結果錶明肝組織Bcl-2、c-Fos錶達顯著增加,而Bax錶達明顯降低(P<0.05),且該組凋亡分析錶明細胞凋亡被明顯抑製.組織形態學可見肝細胞齣現二倍體,覈仁增大,覈膜清晰可見.結論 基于PolⅢ的siRNA錶達載體與PolⅡ的siRNA錶達載體相比對肝細胞有一定的毒副作用,凋亡被抑製,細胞增殖失控.過彊錶達的HBV特異性siRNA可影響機體的生物網絡調控,導緻增殖與凋亡的失衡.
목적 탐토기우재체적표체성소간우RNA(siRNA)대을형간염병독(HBV)전기인소서적독부작용.방법 siRNA표체재체경미정맥주사전염HBV전기인소서,설립특이성siRNA조、PBS대조조、음성질립대조조급정상Balb/c소서대조조.재주사후5 d、12 d、19 d、26 d、33 d、2개월화3개월적불동시간,경기내자정맥채혈검측소서ALT수평변화.ELISA방법검측기혈청간우소-α(IFN-α)、종류배사인자-α(TNF-α)수평.Western blot검측기간장조직중B세포림파류2(Bel-2)、원암기인(c-Fos)、Bcl-2상관X단백(Bax)적표체변화.채용TUNEL염색검측세포조망,HE염색진행조직병이학관찰.결과 기우취합매Ⅲ(PolⅢ)적siRNA표체재체여기우취합매Ⅱ(PolⅡ)적siRNA표체재체상비,장기작용궤체가사전기인소서혈청ALT수평현저승고(P<0.05);ELISA분석발현IFN-α수평전자사호고우후고,단차이무통계학의의(P>0.05).재치료26 d,직도치료3개월,특이성siRNA치료조여PBS대조조상비,TNF-α표체재PolⅢ조표체명현강저(P<0.05);이PolⅡ조TNF-α표체여PBS대조조비교차이무통계학의의.Western blot결과표명간조직Bcl-2、c-Fos표체현저증가,이Bax표체명현강저(P<0.05),차해조조망분석표명세포조망피명현억제.조직형태학가견간세포출현이배체,핵인증대,핵막청석가견.결론 기우PolⅢ적siRNA표체재체여PolⅡ적siRNA표체재체상비대간세포유일정적독부작용,조망피억제,세포증식실공.과강표체적HBV특이성siRNA가영향궤체적생물망락조공,도치증식여조망적실형.
