CAJ | 학술논문

目的:构建能在Hep2细胞中表达的颗粒酶B的表达质粒pVAX1-GrB.方法:用淋巴细胞分离液分离肿瘤组织中的淋巴细胞,并抽提RNA,用RT-PCR方法扩增其分泌蛋白颗粒GrB的全部外显子片段,利用基因重组技术将其定向插入pVAX1多克隆位点.脂质体介导转染Hep2细胞,用间接免疫荧光法观察目的蛋白在细胞中的表达.结果:限制性内切酶酶切和DNA测序分析证实成功获得GrB基因片段,GrB准确克隆入pVAX1的多克隆位点,未改变读码框架.转染Hep2细胞后,检测到目的蛋白的表达.结论:成功构建了pVAX1-GrB,并在Hep2细胞中得到表达.
목적:구건능재Hep2세포중표체적과립매B적표체질립pVAX1-GrB.방법:용림파세포분리액분리종류조직중적림파세포,병추제RNA,용RT-PCR방법확증기분비단백과립GrB적전부외현자편단,이용기인중조기술장기정향삽입pVAX1다극륭위점.지질체개도전염Hep2세포,용간접면역형광법관찰목적단백재세포중적표체.결과:한제성내절매매절화DNA측서분석증실성공획득GrB기인편단,GrB준학극륭입pVAX1적다극륭위점,미개변독마광가.전염Hep2세포후,검측도목적단백적표체.결론:성공구건료pVAX1-GrB,병재Hep2세포중득도표체.