CAJ | 학술논문

目的:体外构建编码人类基因cerb-B1短发卡状RNA(short hairpin RNA,shRNA)的质粒表达载体,观察其对结肠癌LoVo细胞cerb-B1基因和表皮生长因子受体(EGFR)蛋白的特异性抑制作用.方法:体外合成cerb-B1基因的DNA模板引物,和Pgenesil-1质粒构建编码shRNA的表达载体.应用脂质体Lipofectamine 2000转染人结肠癌LoVo细胞,转染成功后以G418筛选4周,实时荧光定量RT-PCR(Real Time RT-PCR)检测cerb-B1基因的mRNA表达,Western-blot检测EGFR蛋白的表达.结果:质粒载体经酶切鉴定证实DNA模板插入质粒成功,且测序与设计结果相符,成功的构建了针对原癌基因cerb-B1的质粒表达载体.质粒载体成功转染后,cerb-B1基因mRNA表达下降了(81.3±2.8)%,EGFR蛋白表达下降了(73.4±2.3)%,和对照质粒载体组比较有显著性差异.结论:说明本研究构建的针对cerb-B1基因的质粒表达载体可以显著抑制cerb-B1基因和EGFR蛋白在人结肠癌LoVo细胞的表达,为结肠癌的基因治疗提供了新的思路.
목적:체외구건편마인류기인cerb-B1단발잡상RNA(short hairpin RNA,shRNA)적질립표체재체,관찰기대결장암LoVo세포cerb-B1기인화표피생장인자수체(EGFR)단백적특이성억제작용.방법:체외합성cerb-B1기인적DNA모판인물,화Pgenesil-1질립구건편마shRNA적표체재체.응용지질체Lipofectamine 2000전염인결장암LoVo세포,전염성공후이G418사선4주,실시형광정량RT-PCR(Real Time RT-PCR)검측cerb-B1기인적mRNA표체,Western-blot검측EGFR단백적표체.결과:질립재체경매절감정증실DNA모판삽입질립성공,차측서여설계결과상부,성공적구건료침대원암기인cerb-B1적질립표체재체.질립재체성공전염후,cerb-B1기인mRNA표체하강료(81.3±2.8)%,EGFR단백표체하강료(73.4±2.3)%,화대조질립재체조비교유현저성차이.결론:설명본연구구건적침대cerb-B1기인적질립표체재체가이현저억제cerb-B1기인화EGFR단백재인결장암LoVo세포적표체,위결장암적기인치료제공료신적사로.