免疫学杂志
免疫學雜誌
면역학잡지
IMMUNOLOGICAL JOURNAL
2008年
1期
1-4,8
,共5页
陈亚静%苏学今%王丽颖%于永利
陳亞靜%囌學今%王麗穎%于永利
진아정%소학금%왕려영%우영리
稳定转染%体内传代%流式细胞术%共聚焦荧光显微镜%MUC1 VNTR
穩定轉染%體內傳代%流式細胞術%共聚焦熒光顯微鏡%MUC1 VNTR
은정전염%체내전대%류식세포술%공취초형광현미경%MUC1 VNTR
目的 获得具有较好致瘤性、在动物体内保留表达外源基因MUC1 VNT R(mucin 1,variable number tandem repeats)能力的稳定转染细胞株B16-GFP-MUC1,供MUC1靶向药物研究中体内抑瘤实验所用到的肿瘤模型.方法 用脂质体转染的方法和有限稀释法获得单克隆细胞株;将该细胞株进行体内传代后,流式分选GFP阳性细胞群,并对分选后细胞用有限稀释法进行单克隆化.用流式细胞仪和共聚焦荧光显微镜观察各时期细胞克隆的GFP表达情况 .结果 脂质体转染方法得到的在G418压力选择下存在的细胞B16-1,其G FP阳性细胞比率最高为80%左右;致瘤性较差,75 d内仅87.5%小鼠出瘤;体外的稳定性观察中,在无抗生素的培养液中观察5周,其阳性率降至20%左右;经过体内接种后仅有10%左右的肿瘤细胞保留了外源基因的表达.而经过体内传代和流式分选后得到的单克隆细胞群B16-39,其GFP阳性细胞比率＞90%;致瘤性为20 d内100%小鼠出瘤;体外培养8周,GFP阳性的细胞比率＞90%; 体内剥离后的肿瘤细胞的GFP阳性细胞比率均＞90%.结论 对于用于体内动物模型的稳定转染细胞,通过体内传代,流式分选并单克隆化,是获得致瘤性好,体内体外较为稳定的稳定转染细胞株的一个可行方案.
目的 穫得具有較好緻瘤性、在動物體內保留錶達外源基因MUC1 VNT R(mucin 1,variable number tandem repeats)能力的穩定轉染細胞株B16-GFP-MUC1,供MUC1靶嚮藥物研究中體內抑瘤實驗所用到的腫瘤模型.方法 用脂質體轉染的方法和有限稀釋法穫得單剋隆細胞株;將該細胞株進行體內傳代後,流式分選GFP暘性細胞群,併對分選後細胞用有限稀釋法進行單剋隆化.用流式細胞儀和共聚焦熒光顯微鏡觀察各時期細胞剋隆的GFP錶達情況 .結果 脂質體轉染方法得到的在G418壓力選擇下存在的細胞B16-1,其G FP暘性細胞比率最高為80%左右;緻瘤性較差,75 d內僅87.5%小鼠齣瘤;體外的穩定性觀察中,在無抗生素的培養液中觀察5週,其暘性率降至20%左右;經過體內接種後僅有10%左右的腫瘤細胞保留瞭外源基因的錶達.而經過體內傳代和流式分選後得到的單剋隆細胞群B16-39,其GFP暘性細胞比率＞90%;緻瘤性為20 d內100%小鼠齣瘤;體外培養8週,GFP暘性的細胞比率＞90%; 體內剝離後的腫瘤細胞的GFP暘性細胞比率均＞90%.結論 對于用于體內動物模型的穩定轉染細胞,通過體內傳代,流式分選併單剋隆化,是穫得緻瘤性好,體內體外較為穩定的穩定轉染細胞株的一箇可行方案.
목적 획득구유교호치류성、재동물체내보류표체외원기인MUC1 VNT R(mucin 1,variable number tandem repeats)능력적은정전염세포주B16-GFP-MUC1,공MUC1파향약물연구중체내억류실험소용도적종류모형.방법 용지질체전염적방법화유한희석법획득단극륭세포주;장해세포주진행체내전대후,류식분선GFP양성세포군,병대분선후세포용유한희석법진행단극륭화.용류식세포의화공취초형광현미경관찰각시기세포극륭적GFP표체정황 .결과 지질체전염방법득도적재G418압력선택하존재적세포B16-1,기G FP양성세포비솔최고위80%좌우;치류성교차,75 d내부87.5%소서출류;체외적은정성관찰중,재무항생소적배양액중관찰5주,기양성솔강지20%좌우;경과체내접충후부유10%좌우적종류세포보류료외원기인적표체.이경과체내전대화류식분선후득도적단극륭세포군B16-39,기GFP양성세포비솔＞90%;치류성위20 d내100%소서출류;체외배양8주,GFP양성적세포비솔＞90%; 체내박리후적종류세포적GFP양성세포비솔균＞90%.결론 대우용우체내동물모형적은정전염세포,통과체내전대,류식분선병단극륭화,시획득치류성호,체내체외교위은정적은정전염세포주적일개가행방안.
